章 緒論 1
節(jié)　色譜法的發(fā)展歷程 1
第二節(jié)　液相色譜法分類 2
一、吸附色譜法 3
二、分配色譜法 4
三、離子交換色譜法 7
四、離子色譜法 8
五、離子對色譜法 9
六、排阻色譜法 11
七、常見問題與解答 12
1．固定相或流動相的極性對溶質的保留行為有何影響？ 12
2．化學鍵合相色譜是什么？有哪些突出的優(yōu)點？ 13
3．化學抑制型離子色譜和非抑制型離子色譜的區(qū)別是什么？ 13
4．離子交換色譜法、離子色譜法、離子對色譜法的區(qū)別是什么？ 14
5．各類液相色譜適宜分離的物質是什么？ 14
6．影響排阻色譜分離效果的因素有哪些？ 15
7．為什么利血平在排阻色譜校正曲線上相對應的分子量要小很多？ 15
8．怎樣選擇一種合適的分析方法來分離已知目標化合物？ 16
9．超臨界流體色譜法有哪些優(yōu)缺點？ 16
10．為什么不用同一種物質來調節(jié)pH值？ 17
11．無機鹽對樣品中無機物的保留行為有什么影響？ 18
12．怎樣選擇離子對試劑？ 18
13．反相離子對色譜與陰離子交換色譜有什么異同點？ 19
14．半制備液相色譜和制備液相色譜有什么區(qū)別？ 19
15．流動相與樣品溶劑不互溶是否可以進樣？ 19
16．親和色譜有哪些用途？ 20
第三節(jié)　相關術語和概念 20
一、色譜流出曲線相關名詞 20
二、分配系數(shù) 22
三、容量因子 23
四、選擇因子 23
五、分離度 23
六、常見問題與解答 24
1．梯度洗脫的原理是什么？ 24
2．影響出峰時間的因素有哪些？ 24
3．怎樣將目標化合物的保留時間提前？ 25
4．什么是容量因子？如何計算容量因子？ 25
5．怎樣通過改變流動相比例來延長保留時間？ 25
6．為什么保留時間總在變化？ 25
7．什么是液相色譜的基線？ 26
8．分離度（R）應大于1.5是指什么？ 26
9．檢出限和定量限有什么區(qū)別？ 26
10．如何獲得檢出限？ 27
第四節(jié)　動力學過程 28
一、塔板理論 28
二、速率理論 29
三、常見問題與解答 32
1．液相色譜中影響峰擴散的因素有哪些？ 32
2．怎樣提高液相色譜的分離度？ 33
3．怎樣提高液相色譜柱的柱效？ 34
4．色譜柱直徑對峰擴散有哪些影響？ 34
第五節(jié)　應用與前景 34
一、重點領域應用情況 34
二、多維色譜技術 35
三、整體色譜柱技術 35
四、衍生化技術 36
五、聯(lián)用技術 36
六、常見問題與解答 38
1．多維液相色譜的優(yōu)勢有哪些？ 38
2．液相色譜與質譜聯(lián)用在定性方面有哪些優(yōu)勢？ 39
3．液相色譜與光譜聯(lián)用技術在形態(tài)分析上有哪些優(yōu)勢? 39
4．液相色譜微型化的意義在哪里？ 40
5．液質聯(lián)用技術能完全替代液相色譜嗎？ 40

第二章 液相色譜儀結構簡介及故障排除 41
節(jié)　儲液器和溶劑過濾器 41
一、儲液器 41
二、溶劑過濾器 42
三、常見問題與解答 43
1．為什么流動相使用前要過濾？ 43
2．液相系統(tǒng)中不銹鋼管路應避免使用哪些溶劑？ 43
3．怎樣防止和處理溶劑過濾器堵塞？ 43
4．怎樣解決切換溶劑后系統(tǒng)壓力和基線不穩(wěn)的問題？ 44
5．如果溶劑跑空，氣泡會不會進到柱子里？ 44
6．怎樣維護液相色譜溶劑過濾器？ 44
7．如何解決溶劑過濾器處氣泡排不干凈的問題？ 44
8．不銹鋼材質與玻璃材質的溶劑過濾器有什么區(qū)別？ 45
9．怎樣防止流動相中長藻？ 45
第二節(jié)　輸液泵 45
一、基本要求與分類 45
二、往復式恒流柱塞泵結構與工作原理 47
三、常見的泵模塊構造 47
四、維護、故障分析及排除方法 49
五、常見問題與解答 58
1．為什么流動相使用前要脫氣？ 58
2．如何判斷和排除單向閥故障？ 59
3．如何解決Waters 2695液相色譜儀出現(xiàn)的solv delivery h/w fault故障？ 60
4．為什么系統(tǒng)壓力會隨著測樣時間增加而變大？ 60
5．為什么儀器接上色譜柱與不接色譜柱壓力基本不變？ 61
6．什么原因導致保留時間和峰面積的重復性不好？ 61
7．如何清洗單向閥？ 62
第三節(jié)　進樣系統(tǒng) 62
一、基本構造 62
二、進樣方式分類 64
三、注意事項 68
四、故障分析及排除方法 69
五、常見問題與解答 70
1．如何更換Ultimate 3000液相色譜注射器？ 70
2．Ultimate 3000液相色譜進樣針與定量環(huán)如何更換？ 70
3．為什么機械手臂抓住小瓶子進完樣品后放不下來？ 71
4．如何使自動進樣器彎曲的進樣針恢復原狀？ 71
5．為什么手動進樣只能選擇定量環(huán)的滿環(huán)進樣或者半環(huán)進樣？ 71
6．液相手動進樣的六通閥與自動進樣器的進樣閥是否一樣？ 72
7．為什么自動進樣器進樣后樣品盤中時常會有液體？ 72
8．怎樣解決由進樣器污染導致的鬼峰問題？ 72
9．安捷倫自動進樣器如何更換進樣針？ 73
10．安捷倫自動進樣器如何更換進樣針座？ 76
第四節(jié)　色譜柱 76
一、柱結構 76
二、柱填料 79
三、填料填充技術 82
四、常見色譜柱及其應用范圍 83
五、常見問題與解答 83
1．液相色譜柱的分離原理有哪些？ 83
2．如何啟用、保管和維護液相色譜柱？ 85
3．如何測試液相色譜柱的柱效？ 85
4．液相色譜柱保護柱有何作用？ 86
5．怎樣解決色譜柱導致的系統(tǒng)壓力過高的問題？ 87
6．實驗結束后如何清洗液相色譜柱？ 87
7．正相色譜柱與反相色譜柱在填料上有什么區(qū)別？ 87
8．如何正確使用液相色譜柱？ 88
9．如何正確安裝液相色譜柱？ 89
10．液相色譜柱的金屬接頭與PEEK接頭有什么區(qū)別？ 90
11．不同品牌色譜柱管線接頭是否通用？ 90
12．如何計算色譜柱柱體積？ 91
13．液相色譜柱溫與組分分離度有什么關系？ 92
第五節(jié)　液相色譜檢測器 92
一、檢測器分類 92
二、性能指標 94
三、常見檢測器 96
四、常見問題與解答 104
1．如何解決示差折光檢測器基線容易漂移的問題？ 104
2．怎樣沖洗已經堵塞的檢測器？ 105
3．二極管陣列檢測器、可變波長檢測器和紫外可見吸收檢測器有什么區(qū)別？ 105
4．檢測器光閘不能復位故障如何排除？ 106
5．基線噪聲和檢測器噪聲的區(qū)別是什么？ 107
6．如何維護紫外檢測器流通池？ 108
7．液相色譜檢測器串聯(lián)使用時有哪些注意事項？ 108
8．如何解決基線噪聲大、基線漂移的問題？ 109
9．什么原因導致做樣時總是在同一時間出現(xiàn)倒峰？ 109
10．蒸發(fā)光散射檢測器熱清洗如何操作？ 109
11．二極管陣列檢測器基線不穩(wěn)的原因有哪些？ 110
12．檢測器出殘留峰如何處理？ 110

第三章 色譜工作站 111
節(jié)　安裝與配置 111
一、安裝要求 112
二、安裝前設置 113
三、工作站軟件安裝 114
四、配置儀器 114
五、常見問題與解答 115
1．怎樣解決安捷倫LC 1260液相色譜工作站許可證錯誤無法登錄的問題？ 115
2．如何處理液相色譜工作站無法通信，停留在駐留模式的問題？ 115
3．如何解決液相色譜工作站顯示存在同名儀器的問題？ 116
4．怎樣解決工作站磁盤存滿導致內存不足，儀器不能正常使用的問題？ 116
5．重新安裝工作站軟件有哪些注意事項？ 116
6．工作站可否安裝殺毒軟件？ 117
7．工作站數(shù)據多久備份一次為宜？ 118
8．怎樣更換老舊工作站安裝平臺？ 118
9．如何用一臺計算機控制多個工作站？ 118
10．如何遠程控制工作站？ 118
第二節(jié)　常用參數(shù)的含義與設定 119
一、數(shù)據采集 119
二、數(shù)據處理 122
三、常見問題與解答 123
1．如何設置半峰寬、斜率、漂移、小峰面積等積分參數(shù)？ 123
2．液相色譜工作站如何設置梯度洗脫程序？ 124
3．如何使用柱溫箱進行控溫？ 124
4．如何正確設定參比波長？ 125
5．為何采集數(shù)據時的數(shù)據信號與后處理時的數(shù)據信號有差異？ 125
6．什么是閾值？怎樣設定閾值？ 125
7．怎樣查看和計算信噪比？ 125
8．信噪比計算中USP、JP、EP等分別代表什么？ 125
第三節(jié)　定性與定量 126
一、定性分析 126
二、定量分析 127
三、常見問題與解答 128
1．內標法和外標法各有哪些優(yōu)缺點？ 128
2．面積歸一法定量需要進樣量一致嗎？ 129
3．如何建立標準加入法的校正曲線？ 129
4．如何對目標化合物進行定性分析？ 129
5．如何選擇是用峰高定量還是峰面積定量？ 130
6．為什么在相同的條件下分析結果卻不一樣？ 130
7．各種曲線擬合方式有哪些區(qū)別？ 131
8．工作站中內標物需要怎樣設置？ 131
9．單點校正法的適用范圍有哪些？ 131
10．標準曲線的點及線性范圍怎樣設置？ 132

第四章 液相色譜樣品前處理 133
節(jié)　液固萃取 134
一、直接萃取 134
二、超聲萃取 135
三、影響萃取的因素 136
四、常見問題與解答 138
1．超聲萃取有哪些優(yōu)點？ 138
2．農藥檢測用的乙醚該如何除去過氧化物？ 139
3．常見的固體提取方式有哪些？ 139
4．振蕩和超聲哪個萃取效率更高？ 140
5．EPA3550 關于超聲萃取的方法中為什么要用無水硫酸鈉？ 141
6．超聲萃取具體怎樣操作？ 141
7．超聲萃取后怎樣進行土壤顆粒物和萃取液的分離？ 142
8．索氏提取是否可以用其他提取方式替代？ 142
9．水蒸氣蒸餾和共水蒸餾有什么區(qū)別？ 142
10．水蒸氣蒸餾有哪些適用范圍？ 143
第二節(jié)　液液萃取 143
一、液液萃取的原理 143
二、萃取分配常數(shù) 144
三、萃取率 144
四、萃取溶劑的性質與選擇 145
五、萃取液乳化 148
六、常見問題與解答 148
1．液液萃取時乳化產生的原因及解決方法有哪些？ 148
2．液液萃取體系中的兩相比例對萃取效果有哪些影響？ 149
3．如何選擇液液萃取的萃取溶劑？ 150
4．農殘前處理過程中加入氯化鈉能使有機相和水相完全分離嗎？ 150
5．影響液液萃取過程的因素有哪些？ 151
6．什么是萃取劑？什么是稀釋劑？ 151
7．液液萃取過程有哪些特點？ 151
8．液液萃取與固相萃取有什么區(qū)別？ 151
9．常見的液液萃取方式有哪些？ 152
第三節(jié)　固相萃取 152
一、吸附填料與化合物間的作用原理 152
二、吸附填料的類別 153
三、固相萃取吸附模式 156
四、固相萃取的影響因素 158
五、常見問題與解答 160
1．使用 SPE柱時引起小柱堵塞的原因及其解決辦法有哪些？ 160
2．SPE柱的特點及使用要求有哪些？ 160
3．如何避免固相萃取使用過程中產生溝渠效應？ 161
4．封端C18固相萃取柱與未封端C18固相萃取柱有哪些區(qū)別？ 162
5．如何正確選擇合適的氧化鋁固相萃取柱？ 162
6．可以用WAX固相萃取小柱替代MAX固相萃取小柱嗎？ 163
7．固相萃取時淋洗液為何需要抽干？ 163
8．導致固相萃取回收率低的原因有哪些？ 164
9．如何正確選擇固相萃取柱規(guī)格型號？ 164
10．樣品預處理的方式、作用和目的是什么？ 165
第四節(jié)　QuEChERS方法 165
一、萃取體系分類 166
二、溶劑提取 166
三、提取液凈化 167
四、常見問題與解答 168
1．QuEChERS方法在時間、人工、成本上有哪些優(yōu)勢？ 168
2．QuEChERS中PSA和C18的凈化機理是什么？ 168
3．提取溶劑酸化乙腈和純乙腈有什么區(qū)別？ 169
4．QuEChERS方法中緩沖鹽體系的pH值范圍和作用是什么？ 170
5．如何選擇QuEChERS方法中的凈化填料？ 170
6．QuEChERS方法中凈化提取液的體積如何選擇？ 171
7．如何解決無水硫酸鈉大量放熱的問題？ 172
8．為什么QuEChERS方法在畜產品中的農藥殘留檢測中使用不多？ 172
9．QuEChERS方法中加入石墨化炭黑的作用是什么？ 172
10．QuEChERS方法已經寫入哪些標準方法？ 173
第五節(jié)　快速溶劑萃取 173
一、快速溶劑萃取原理 173
二、快速溶劑萃取的優(yōu)勢及特點 174
三、快速溶劑萃取的模式與步驟 175
四、快速溶劑萃取的影響因素 176
五、常見問題與解答 177
1．快速溶劑萃取技術在食品檢測中的應用有哪些？ 177
2．快速溶劑萃取技術可應用于哪些領域？ 178
3．硅藻土的加入量對測定結果有無影響？ 178
4．如何優(yōu)化甲胺磷的萃取條件？ 178
5．快速溶劑萃取在哪些國家標準中有應用？ 179
6．如何解決提取液體積不一致的問題？ 179
7．快速溶劑萃取法濾膜的材質如何選擇？ 179
8．快速溶劑萃取儀使用后需要進行哪些例行維護？ 180

第五章 液相色譜法方法開發(fā) 181
節(jié)　流動相 181
一、流動相性質的要求 181
二、流動相常用溶劑 183
三、流動相的選擇與優(yōu)化 184
四、等度洗脫和梯度洗脫 188
五、常見問題與解答 190
1．方法開發(fā)中甲醇和乙腈作為流動相有何區(qū)別？ 190
2．四氫呋喃和三乙胺在防止色譜峰拖尾方面有什么區(qū)別？ 191
3．高壓梯度洗脫與低壓梯度洗脫有什么區(qū)別？ 191
4．流動相加緩沖液和調節(jié)pH值的原則有哪些？ 192
5．如何正確選擇流動相改性劑？ 193
6．液相色譜在使用緩沖鹽時的注意事項有哪些？ 194
7．液相色譜梯度洗脫時的注意事項有哪些？ 194
8．飽和食鹽水是否可以直接進液相色譜儀？ 195
9．水相和有機相都加酸的目的是什么？ 196
10．用玻璃瓶裝流動相的原因有哪些？ 196
11．某通道或某泵長期都是一種流動相，是否需要更換？ 196
12．如何避免液相色譜分析中的溶劑效應？ 197
13．雙泵運行乙腈和水流動相，產生基線波動的原因有哪些？ 198
14．流動相中加入緩沖鹽能改善基線漂移嗎？ 198
第二節(jié)　色譜柱 199
一、色譜柱的填料 199
二、色譜柱的分類和應用范圍 200
三、常見問題與解答 204
1．色譜柱長短對分析有什么影響？ 204
2．更換色譜柱時的注意事項有哪些？ 205
3．方法開發(fā)時需要使用保護柱嗎？ 205
4．有機相對反相色譜柱保留時間影響的機理有哪些？ 206
5．反相色譜系統(tǒng)切換成正相色譜系統(tǒng)有哪些需要注意的問題？ 207
6．C18柱為什么不適合用純水作流動相？ 208
7．柱溫對分離度有哪些影響？ 208
8．液相色譜柱封端與不封端對檢測結果有哪些影響？ 209
9．色譜柱粒徑及孔徑對保留時間有哪些影響？ 210
10．BEH Amide柱適用范圍和注意事項有哪些？ 210
11．T3色譜柱和C18色譜柱有哪些區(qū)別？ 212
12．導致色譜峰保留時間漂移、柱壓波動變大的原因有哪些？ 212
13．氨基柱使用注意事項有哪些？ 213
14．HILIC模式有哪些適用范圍？ 213
15．如何確定色譜柱的流速？ 216
第三節(jié)　檢測器 217
一、檢測器選用原則 217
二、各類檢測器適用范圍 217
三、常見問題與解答 222
1．如何選擇液相色譜的檢測器？ 222
2．如何正確選擇目標化合物紫外吸收波長？ 222
3．不同溶劑對目標化合物的紫外吸收波長有什么影響？ 223
4．熒光激發(fā)波長與熒光發(fā)射波長有什么關系？ 224
5．紫外檢測器與蒸發(fā)光散射檢測器哪個靈敏度更高？ 225
6．示差折光檢測器能不能使用梯度洗脫？ 225
7．示差折光檢測器的應用范圍和注意事項有哪些？ 225
8．蒸發(fā)光散射檢測器使用注意事項有哪些？ 226
9．電導檢測器和安培檢測器的區(qū)別在哪里？ 227
10．為什么在不同的檢測器上色譜峰的分離度不同？ 227
11．為什么檢測器采集不到信號？ 228
12．檢測器出鬼峰如何處理？ 228

第六章 液相色譜法的應用 229
節(jié)　液相色譜在生物制品分析中的應用 229
一、液相色譜在氨基酸、多肽和蛋白質分析中的應用 230
二、液相色譜在核堿、核苷、核苷酸和核酸分析中的應用 234
三、液相色譜在生物胺分析中的應用 238
四、常見問題與解答 239
1．液相色譜分析多肽藥物時儀器條件如何確定？ 239
2．如何使用液相色譜測定多肽中某種肽含量？ 239
3．做核酸純化分離時對液相色譜有什么要求？ 240
4．普通C18柱能否用來分離蛋白質？ 241
5．如何建立液相色譜法分析生物胺的色譜條件？ 241
6．生物胺樣品衍生產物用乙腈復溶后的沉淀是否影響測定結果？ 242
7．氨基酸衍生產物可以放置多久？ 242
8．如何采用液相色譜測定氨基酸？ 242
第二節(jié)　液相色譜在醫(yī)學分析中的應用 243
一、液相色譜在藥物分析中的應用 243
二、液相色譜在臨床醫(yī)學分析中的應用 245
三、常見問題與解答 247
1．BB、BV等分離模式在新藥申報時該如何設定和選擇？ 247
2．如何設置橙皮苷液相色譜檢測方法的檢測時間？ 248
3．如何進行湯劑樣品的前處理？ 248
4．如何選擇紫外分光光度法與高效液相色譜法？ 249
5．為何薄層色譜法與液相色譜法檢測藥材提取液結果不一致？ 249
6．《中國藥典》中規(guī)定的理論塔板數(shù)參數(shù)在實際分析中重要嗎？ 250
7．液相色譜定性鑒別的分離度要求是多少？ 250
8．甘草苷的液相色譜檢測方法可以用甲醇作流動相嗎？ 250
9．分析三七含量時分離度達不到《中國藥典》要求該如何解決？ 251
10．怎樣做系統(tǒng)適應性試驗？ 251
第三節(jié)　液相色譜在食品分析中的應用 252
一、液相色譜在食品營養(yǎng)成分分析中的應用 252
二、液相色譜在食品添加劑成分分析中的應用 254
三、液相色譜在食品有毒有害物質殘留分析中的應用 257
四、常見問題與解答 262
1．液相色譜分析糖類需要注意的問題有哪些？ 262
2．如何選擇氨基酸分析時可以使用的衍生化試劑？ 263
3．液相色譜可以檢測維生素的種類有哪些？ 264
4．如何解決高效液相色譜檢測有機酸分離度不好的問題？ 265
5．如何選擇食品中丙酸液相色譜分析方法的流動相？ 266
6．防腐劑檢測時前處理需要注意哪些問題？ 267
7．為什么分析食品中苯甲酸和山梨酸時保留時間會延遲？ 267
8．液相色譜分析食品中脫氫乙酸為何不出峰？ 268
9．如何提升食品中富馬酸二甲酯液相色譜檢測方法的檢出限？ 269
10．液相色譜分析脂溶性食品中抗氧化劑時需要注意哪些問題？ 269
11．液相色譜測定合成色素不出峰的原因有哪些？ 270
12．液相色譜測定氨基甲酸酯的注意事項有哪些？ 271
13．磺酰脲類農藥液相色譜法分析條件是什么？ 272
14．液相色譜法中流動相配比對峰高和峰面積有哪些影響？ 273
15．如何提高液相色譜法檢測磺胺類物質的回收率？ 273
16．為什么選擇Na2EDTA-Mcllvaine緩沖液作為提取劑？ 274
17．為什么測定沙星類物質時樣品與標準樣品保留時間不一致？ 274
18．免疫親和柱-高效液相色譜法測定真菌毒素有哪些注意事項？ 275
第四節(jié)　液相色譜在環(huán)境分析中的應用 276
一、液相色譜在水環(huán)境分析中的應用 276
二、液相色譜在大氣環(huán)境分析中的應用 279
三、液相色譜在土壤環(huán)境分析中的應用 283
四、常見問題與解答 286
1．測定多環(huán)芳烴時出峰數(shù)量、順序與標準不同的原因有哪些？ 286
2．環(huán)境空氣中酚類化合物測定時出峰不完全的原因有哪些？ 286
3．如何按照HJ 4782009標準進行試劑空白實驗？ 287
4．液相色譜法檢測水中苯并芘不出峰是什么原因？ 288
5．如何提高環(huán)境空氣中醛酮類化合物的分離度？ 289
6．是否可以用液相色譜來檢測表面活性劑十二烷基苯磺酸鈉？ 289
7．如何使用液相色譜法檢測水中鄰苯二甲酸二甲酯？ 290
8．液相色譜法檢測環(huán)酰菌胺流動相能否不采用緩沖鹽體系？ 290
9．為什么水中阿特拉津的實際檢出限不滿足標準要求？ 291
第五節(jié)　液相色譜在化工分析中的應用 291
一、液相色譜在石油化工分析中的應用 292
二、液相色譜在基礎化工分析中的應用 293
三、液相色譜在化工染料分析中的應用 294
四、常見問題與解答 295
1．如何測定母液中對甲苯磺酸及其產物的占比？ 295
2．如何采用液相色譜法分析樣品中甲苯二異氰酸酯？ 296
3．測定中間餾分芳烴含量時的注意事項有哪些？ 298
4．有機胺類化合物如何采用液相色譜進行檢測？ 300
5．堿性化合物分離時前沿峰如何解決？ 300
6．如何對含有三苯基膦和三苯基氧膦的樣品進行定性檢測？ 300
7．如何建立硼酸酯結構化合物的液相色譜檢測條件？ 301
第六節(jié)　液相色譜在其他領域中的應用 301
一、液相色譜在違禁藥物檢查分析中的應用 302
二、液相色譜在毒品檢驗分析中的應用 302
三、液相色譜在煙草化學分析中的應用 303
四、液相色譜在化妝品分析中的應用 305
五、常見問題與解答 309
1．如何選擇應用于紡織品檢測的高效液相色譜儀？ 309
2．如何用高效液相色譜儀檢測紡織品中的甲醛、偶氮？ 310
3．如何優(yōu)化化妝品中性激素的液相色譜測定方法？ 310
4．液相色譜法檢測氫醌時目標峰旁邊為何有分叉峰？ 310
5．如何優(yōu)化化妝品中氫醌和苯酚檢測的前處理方法？ 311
6．測定飼料中丙二醛時丙二醛后面為什么有雜峰？ 311
7．為什么同一樣品使用不同進樣瓶進樣結果不一樣？ 312
8．為什么測定飼料中維生素K3時重復性不好？ 313

參考文獻 314