第一部分分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)知識

第1章分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室規(guī)則和安全/2

1.1實(shí)驗(yàn)室一般規(guī)則/2

1.2實(shí)驗(yàn)室常識/2

1.3實(shí)驗(yàn)室安全基礎(chǔ)知識/3

1.4實(shí)驗(yàn)室合理設(shè)計和布局/4

1.5實(shí)驗(yàn)室急救/4

1.6廢棄物、放射性物質(zhì)及有毒物質(zhì)的處理/5

第2章分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)常用儀器設(shè)備及其操作/7

2.1分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)常用儀器設(shè)備/7

2.2冷凍離心機(jī)/8

2.3電泳儀/9

2.4分析天平/10

2.5分光光度計/10

2.6數(shù)字式酸度計/11

2.7普通PCR儀/12

2.8實(shí)時熒光定量PCR儀/13

2.9凝膠成像系統(tǒng)/14

2.10多功能微孔板酶標(biāo)儀/15

2.11搖床/16

2.12水的凈化裝置/16

2.13消毒設(shè)備/17

第3章細(xì)菌培養(yǎng)常用培養(yǎng)基和抗生素溶液的配制方法/19

3.1常用培養(yǎng)基的配制方法/19

3.2常用抗生素溶液的配制方法/20

第4章GenBank數(shù)據(jù)庫簡介/22

4.1概述/22

4.2GenBank的建立與發(fā)展/23

4.3GenBank數(shù)據(jù)庫結(jié)構(gòu)/25

4.4基因基本信息檢索/29

4.5GeneBank在分子生物學(xué)中的應(yīng)用/30

分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)夸浀诙�部分分子生物學(xué)常用實(shí)驗(yàn)技術(shù)

第5章核酸的制備/36

5.1核酸制備的原理與方法/36

5.2質(zhì)粒的生物學(xué)特性/39

5.3常用克隆載體的特征/41

實(shí)驗(yàn)1真核生物基因組DNA提取/42

實(shí)驗(yàn)2總RNA的提取及鑒定/44

實(shí)驗(yàn)3質(zhì)粒DNA的微量提取和鑒定/48

第6章DNA的酶切和凝膠電泳/51

6.1限制性核酸內(nèi)切酶的特性及應(yīng)用/51

6.2瓊脂糖凝膠電泳/53

6.3聚丙烯酰胺凝膠電泳/55

實(shí)驗(yàn)4DNA的限制性核酸內(nèi)切酶酶切及凝膠電泳/57

第7章DNA轉(zhuǎn)化/61

7.1感受態(tài)細(xì)胞的制備/61

7.2轉(zhuǎn)化/61

實(shí)驗(yàn)5大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞的制備和轉(zhuǎn)化/63

第8章DNA重組的基本流程和方法/68

8.1目的基因的獲取/68

8.2DNA分子的體外重組/69

8.3DNA重組體的導(dǎo)入/70

8.4受體細(xì)胞的篩選/72

8.5基因表達(dá)/73

實(shí)驗(yàn)6DNA片段的黏性末端連接法/74

實(shí)驗(yàn)7DNA片段的黏�财蕉诉B接法/75

實(shí)驗(yàn)8重組子的篩選與鑒定/77

第9章聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)/80

9.1常規(guī)PCR技術(shù)的原理及操作/80

9.2引物設(shè)計原則及合成/84

9.3PCR產(chǎn)物的純化與鑒定/85

9.4PCR技術(shù)的延伸及應(yīng)用/87

實(shí)驗(yàn)9PCR擴(kuò)增特異性DNA片段及擴(kuò)增產(chǎn)物的純化與鑒定/91

實(shí)驗(yàn)10實(shí)時熒光定量PCR技術(shù)檢測基因的表達(dá)量/93

第10章核酸雜交技術(shù)/98

10.1幾種核酸探針標(biāo)記方法/98

10.2核酸探針制備和純化技術(shù)/101

實(shí)驗(yàn)11核酸探針制備和純化/109

實(shí)驗(yàn)12菌落原位雜交法/112

實(shí)驗(yàn)13miRNA原位雜交/114

第三部分分子生物學(xué)綜合性、研究性實(shí)驗(yàn)

第11章外源基因的表達(dá)/118

11.1外源基因在原核生物中的表達(dá)/118

11.2外源基因在酵母細(xì)胞中的表達(dá)/125

實(shí)驗(yàn)14外源基因在大腸桿菌中的誘導(dǎo)表達(dá)/130

實(shí)驗(yàn)15SDS�睵AGE電泳檢測表達(dá)的外源蛋白/131

實(shí)驗(yàn)16脂肪酶基因在枯草桿菌中表達(dá)及表達(dá)產(chǎn)物的研究/133

實(shí)驗(yàn)17外源基因在酵母細(xì)胞中表達(dá)及表達(dá)產(chǎn)物的研究/135

第12章利用分子生物學(xué)技術(shù)進(jìn)行細(xì)菌的種屬鑒定/137

12.1微生物分類鑒定方法的發(fā)展/137

12.216S rDNA分類鑒定技術(shù)的原理/138

實(shí)驗(yàn)18利用16S rDNA序列分析技術(shù)進(jìn)行細(xì)菌種屬的鑒定/139

第13章基因表達(dá)差異的分析/144

13.1差減雜交/144

13.2mRNA差異顯示反轉(zhuǎn)錄PCR/145

13.3cDNA代表性差異分析/145

13.4差減抑制消減雜交方法/146

實(shí)驗(yàn)19半定量RT�睵CR技術(shù)檢測基因的表達(dá)差異/147

附錄/152

附錄A常用單位及換算方法/152

附錄B常用核酸、蛋白質(zhì)換算數(shù)據(jù)/152

附錄C核酸的單位及有關(guān)數(shù)據(jù)/153

附錄D常見核酸分子的長度和相對分子質(zhì)量/153

附錄E色素在聚丙烯酰胺凝膠中的移動參數(shù)/154

參考文獻(xiàn)/155