目錄
前言
第一章 單核吞噬細(xì)胞 1
第一節(jié) 單核吞噬細(xì)胞簡(jiǎn)介 1
第二節(jié) 單核巨噬細(xì)胞的分離 2
一、人外周血單個(gè)核細(xì)胞的分離 3
二、小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的分離和純化 4
三、小鼠肺內(nèi)巨噬細(xì)胞的分離 6
四、骨髓巨噬細(xì)胞的分離和誘導(dǎo)培養(yǎng) 7
第三節(jié) 單核巨噬細(xì)胞表型檢測(cè) 8
一、直接法流式檢測(cè)巨噬細(xì)胞的表型 9
二、間接法流式檢測(cè)巨噬細(xì)胞的表型 10
第四節(jié) 巨噬細(xì)胞的活化及相關(guān)檢測(cè) 11
一、巨噬細(xì)胞的活化 11
二、超氧陰離子的檢測(cè) 12
三、一氧化氮的檢測(cè) 13
第五節(jié) 巨噬細(xì)胞吞噬和殺傷功能的檢測(cè) 15
一、巨噬細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞 15
二、巨噬細(xì)胞吞噬FITC標(biāo)記的細(xì)菌 16
三、巨噬細(xì)胞殺傷功能的檢測(cè) 17
四、Fc受體介導(dǎo)的吞噬作用 19
五、FcR介導(dǎo)的黏附作用 20
第六節(jié) 巨噬細(xì)胞抗腫瘤活性的檢測(cè) 21
一、H33342釋放法檢測(cè)巨噬細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞的殺傷 22
二、51Cr釋放法檢測(cè)巨噬細(xì)胞對(duì)靶細(xì)胞的殺傷 23
第七節(jié) 單核巨噬細(xì)胞趨化功能的檢測(cè) 24
第八節(jié) 結(jié)語(yǔ) 26
參考文獻(xiàn) 28
第二章 樹(shù)突狀細(xì)胞 29
第一節(jié) 樹(shù)突狀細(xì)胞的分離 29
一、小鼠脾臟樹(shù)突狀細(xì)胞的分離 29
二、人外周血樹(shù)突狀細(xì)胞的分離 31
第二節(jié) 樹(shù)突狀細(xì)胞的培養(yǎng) 34
一、小鼠骨髓前體細(xì)胞培養(yǎng)樹(shù)突狀細(xì)胞 34
二、人樹(shù)突狀細(xì)胞的培養(yǎng) 35
第三節(jié) 樹(shù)突狀細(xì)胞表型和功能檢測(cè) 38
一、表型檢測(cè) 38
二、吞噬功能檢測(cè) 39
三、NO檢測(cè) 40
四、細(xì)胞因子的檢測(cè) 41
五、抗原提呈功能檢測(cè) 41
六、混合淋巴細(xì)胞反應(yīng) 42
第四節(jié) 漿細(xì)胞樣樹(shù)突狀細(xì)胞 43
一、漿細(xì)胞樣樹(shù)突狀細(xì)胞的分離 44
二、漿細(xì)胞樣樹(shù)突狀細(xì)胞的培養(yǎng) 45
三、漿細(xì)胞樣樹(shù)突狀細(xì)胞表型及功能檢測(cè) 47
第五節(jié) 其他樹(shù)突狀細(xì)胞亞群 47
參考文獻(xiàn) 49
第三章 NK與NKT細(xì)胞 50
第一節(jié) 概述 50
第二節(jié) NK細(xì)胞的分離 51
一、各種NK細(xì)胞分離方法的比較 51
二、人的NK細(xì)胞的分離 52
三、小鼠的NK細(xì)胞的分離 56
第三節(jié) NK細(xì)胞的功能檢測(cè) 60
一、靶細(xì)胞的選擇 62
二、形態(tài)學(xué)檢測(cè)法 62
三、同位素釋放實(shí)驗(yàn):51Cr釋放檢測(cè)法 63
四、LDH釋放檢測(cè)法 64
五、AnnexinV/7GAAD標(biāo)記流式檢測(cè)法 66
第四節(jié) 小鼠體內(nèi)刪除NK細(xì)胞 67
第五節(jié) NKT細(xì)胞 69
一、人NKT細(xì)胞的分離與培養(yǎng) 69
二、小鼠NKT細(xì)胞的分離與培養(yǎng) 75
參考文獻(xiàn) 77
第四章 T淋巴細(xì)胞 78
第一節(jié) 引言 78
第二節(jié) T細(xì)胞分離 79
一、尼龍棉柱分離法 79
二、E花環(huán)分離法 80
三、微量細(xì)胞毒法 82
四、磁珠分選法 83
五、流式分選法 84
第三節(jié) T細(xì)胞亞群的分離與培養(yǎng) 85
一、CD4＋T細(xì)胞及其亞群的分離培養(yǎng) 85
二、CD8＋T細(xì)胞分離培養(yǎng)以及CTL的體外誘導(dǎo) 88
第四節(jié) T細(xì)胞克隆及T細(xì)胞雜交瘤的建立 89
一、人T細(xì)胞克隆的建立 89
二、T細(xì)胞雜交瘤技術(shù) 92
第五節(jié) T細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn) 95
一、體外增殖檢測(cè) 95
二、體內(nèi)增殖檢測(cè) 99
第六節(jié) 抗原特異性T淋巴細(xì)胞反應(yīng) 102
一、CD4＋T淋巴細(xì)胞反應(yīng) 102
二、CD8＋T淋巴細(xì)胞反應(yīng) 103
第七節(jié) 混合淋巴細(xì)胞反應(yīng) 105
一、單向混合淋巴細(xì)胞反應(yīng) 105
二、雙向混合淋巴細(xì)胞反應(yīng) 106
第八節(jié) CTL殺傷實(shí)驗(yàn) 107
一、51Cr釋放法 107
二、LDH釋放法 109
三、流式細(xì)胞標(biāo)記法 110
四、體內(nèi)殺傷實(shí)驗(yàn) 111
第九節(jié) 調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的分離、誘導(dǎo)分化與功能檢測(cè) 112
一、Treg的分離純化 113
二、Treg的體外誘導(dǎo)分化 114
三、Treg的功能檢測(cè) 115
第十節(jié) 記憶性T細(xì)胞的研究方法 117
一、流式胞內(nèi)染色技術(shù) 118
二、Tetramer技術(shù)的原理與應(yīng)用 120
三、TCR轉(zhuǎn)基因小鼠 122
參考文獻(xiàn) 124
第五章 B淋巴細(xì)胞 126
第一節(jié) 概述 126
第二節(jié) B淋巴細(xì)胞的分離和亞群鑒定 126
一、B淋巴細(xì)胞的分離 126
二、各類B細(xì)胞亞群的鑒定和分離 131
三、抗原特異性記憶性B細(xì)胞的鑒定 133
第三節(jié) B淋巴細(xì)胞的分化發(fā)育鑒定 136
一、從造血干細(xì)胞到B淋巴細(xì)胞的分化鑒定 137
二、B淋巴細(xì)胞在骨髓和脾臟中分化發(fā)育的檢測(cè) 139
三、B淋巴細(xì)胞在外周免疫系統(tǒng)中的成熟過(guò)程檢測(cè) 144
四、B淋巴細(xì)胞的遷移檢測(cè) 145
第四節(jié) B細(xì)胞的功能分析 146
一、B淋巴細(xì)胞的活化方法 146
二、B淋巴細(xì)胞的增殖檢測(cè) 147
三、免疫球蛋白的類別轉(zhuǎn)換的誘導(dǎo)和鑒定 150
四、生發(fā)中心反應(yīng)和漿細(xì)胞的檢測(cè) 152
五、B淋巴細(xì)胞的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 158
六、從B淋巴細(xì)胞中分離脂筏 164
參考文獻(xiàn) 168
第六章 抗原制備的原理及應(yīng)用 169
第一節(jié) 天然抗原的制備原理及應(yīng)用 169
一、抗原的粗提 170
二、抗原的分離純化 171
三、抗原的濃縮 180
四、抗原的保存 181
五、抗原的鑒定 182
第二節(jié) 人工抗原的制備原理 182
一、人工結(jié)合抗原 182
二、人工合成多肽抗原的制備原理和應(yīng)用 184
參考文獻(xiàn) 187
第七章 抗體 188
第一節(jié) 概述 188
第二節(jié) 多克隆抗體的制備及鑒定 189
一、抗血清的制備 189
二、抗血清質(zhì)量的檢測(cè) 191
第三節(jié) 單克隆抗體的制備及鑒定 191
第四節(jié) 基因工程抗體的人源化策略和方法 197
一、基因工程抗體的人源化及其高效表達(dá) 198
二、小分子抗體 209
第五節(jié) 抗體的純化 211
一、樣品的預(yù)處理 211
二、蛋白A或蛋白G交聯(lián)瓊脂糖凝膠親和層析法純化抗體 212
參考文獻(xiàn) 214
第八章 補(bǔ)體 216
第一節(jié) 概述 216
第二節(jié) 補(bǔ)體活性的測(cè)定 217
一、血清補(bǔ)體總活性的測(cè)定 217
二、補(bǔ)體旁路途徑的總補(bǔ)體活性的測(cè)定 220
第三節(jié) 補(bǔ)體介導(dǎo)的細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn) 221
一、形態(tài)學(xué)方法檢測(cè)補(bǔ)體介導(dǎo)的細(xì)胞毒活性 221
二、其他方法 222
第四節(jié) 補(bǔ)體結(jié)合的相關(guān)實(shí)驗(yàn) 223
一、補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn) 223
二、免疫黏附血凝實(shí)驗(yàn) 223
第五節(jié) 補(bǔ)體成分的測(cè)定 225
一、C4的測(cè)定 225
二、B因子的測(cè)定 227
三、C3的測(cè)定 229
四、C1q的測(cè)定 230
五、C1INH的測(cè)定 230
第六節(jié) 補(bǔ)體遺傳多態(tài)性的檢測(cè) 231
一、C4遺傳多態(tài)性的檢測(cè) 231
二、C2遺傳多態(tài)性的檢測(cè) 233
三、B因子遺傳多態(tài)性的檢測(cè) 234
參考文獻(xiàn) 234
第九章 細(xì)胞因子及細(xì)胞因子受體 235
第一節(jié) 概述 236
第二節(jié) 白細(xì)胞介素 239
一、白細(xì)胞介素及其他細(xì)胞因子調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)的檢測(cè) 239
二、一些IL的特殊生物學(xué)活性的檢測(cè) 248
三、IL蛋白質(zhì)的檢測(cè) 250
四、ILmRNA的檢測(cè) 250
第三節(jié) 腫瘤壞死因子 250
一、檢測(cè)TNF及細(xì)胞因子細(xì)胞毒活性的方法 251
二、TNF及其受體家族成員蛋白質(zhì)的檢測(cè) 254
三、TNF及其受體家族成員 mRNA的檢測(cè) 255
第四節(jié) 干擾素 255
一、檢測(cè)IFN和其他細(xì)胞因子抗病毒活性的方法 255
二、檢測(cè)IFN生物學(xué)活性的其他方法 260
三、IFN蛋白質(zhì)的檢測(cè) 262
四、IFNmRNA的檢測(cè) 262
第五節(jié) 趨化因子 263
一、趨化因子趨化活性的檢測(cè) 263
二、趨化因子蛋白質(zhì)的檢測(cè) 273
三、趨化因子mRNA的檢測(cè) 273
第六節(jié) 集落刺激因子 273
一、SCF誘導(dǎo)MC/9細(xì)胞增殖試驗(yàn) 274
二、集落形成試驗(yàn) 275
三、CSF蛋白質(zhì)的檢測(cè) 280
四、CSFmRNA的檢測(cè) 281
第七節(jié) 細(xì)胞表面和細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子檢測(cè)技術(shù) 281
一、細(xì)胞表面細(xì)胞因子的分析 282
二、細(xì)胞內(nèi)細(xì)胞因子的分析 286
第八節(jié) 細(xì)胞因子受體研究技術(shù) 290
一、膜型細(xì)胞因子受體檢測(cè)方法 291
二、可溶性細(xì)胞因子受體檢測(cè)方法 294
參考文獻(xiàn) 294
第十章 人白細(xì)胞抗原分型技術(shù) 295
第一節(jié) HLA和HLA分型概述 295
一、HLA概念 295
二、HLA抗原分類 295
三、HLA遺傳特點(diǎn) 296
四、HLA分型及醫(yī)學(xué)應(yīng)用 297
第二節(jié) 血清學(xué)分型技術(shù) 297
一、HLAGA、HLAGB、HLAGC抗原的血清學(xué)分型方法 298
二、HLAGDR、HLAGDQ抗原的血清學(xué)分型方法 299
第三節(jié) 細(xì)胞學(xué)分型技術(shù) 300
一、純合子細(xì)胞分型法 301
二、預(yù)致敏淋巴細(xì)胞定型法 301
第四節(jié) DNA分型技術(shù) 302
一、限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性-聚合酶鏈反應(yīng) 302
二、序列特異性寡核苷酸-聚合酶鏈反應(yīng) 302
三、序列特異性引物-聚合酶鏈反應(yīng) 303
四、單鏈構(gòu)象多態(tài)性-聚合酶鏈反應(yīng) 303
五、PCR指紋圖譜 304
六、基因芯片 304
七、展望 305
參考文獻(xiàn) 305
第十一章 模式識(shí)別受體 307
第一節(jié) 模式識(shí)別受體的種類 307
第二節(jié) Toll樣受體的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 309
一、Toll樣受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的主要途徑及常用研究方法 309
二、Toll樣受體信號(hào)分子功能研究的主要方法 311
參考文獻(xiàn) 313
第十二章 免疫熒光技術(shù) 314
第一節(jié) 概述 314
第二節(jié) 免疫熒光技術(shù)的基本原理 315
一、抗原 抗體反應(yīng) 315
二、熒光的產(chǎn)生原理 315
三、熒光效率和影響熒光效率的因素 315
第三節(jié) 免疫熒光的基本技術(shù) 316
一、抗體的選擇 316
二、熒光素的選擇 316
三、熒光素的種類 316
四、熒光素標(biāo)記抗體的方法 319
五、熒光抗體的保存 321
六、免疫熒光技術(shù)的染色方法 321
第四節(jié) 免疫熒光的分析和檢測(cè)技術(shù) 323
一、熒光偏振免疫分析 324
二、時(shí)間分辨熒光免疫分析 324
參考文獻(xiàn) 327
第十三章 放射免疫技術(shù) 328
第一節(jié) 標(biāo)記抗原的放射免疫技術(shù) 328
一、放射免疫技術(shù)原理及應(yīng)用 328
二、實(shí)驗(yàn)方法 332
三、放射免疫分析的應(yīng)用舉例 337
第二節(jié) 標(biāo)記抗體的免疫放射技術(shù) 338
一、免疫放射技術(shù)原理 338
二、免疫放射分析的應(yīng)用舉例 340
第三節(jié) 放射受體分析技術(shù) 341
一、放射受體分析技術(shù)原理 341
二、放射受體分析應(yīng)用舉例 343
第四節(jié) 放射免疫實(shí)驗(yàn)室的放射性防護(hù) 344
一、放射性污染的危害 344
二、放射源的管理 344
三、放射免疫分析工作人員的個(gè)人防護(hù) 345
參考文獻(xiàn) 345
第十四章 免疫酶技術(shù) 346
第一節(jié) 概述 346
一、免疫酶技術(shù)的原理 346
二、免疫酶技術(shù)的分類和命名 346
三、免疫酶技術(shù)的特點(diǎn) 347
第二節(jié) 標(biāo)記酶及其底物 347
一、標(biāo)記酶及其制備 347
二、抗酶抗體及酶 抗酶復(fù)合物的制備 356
第三節(jié) 異相免疫酶標(biāo)技術(shù) 357
一、異相酶免疫測(cè)定方法 357
二、酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法 357
第四節(jié) 酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)檢測(cè)法 364
一、單色ELISPOT法檢測(cè)分泌細(xì)胞因子的細(xì)胞 366
二、雙色ELISPOT法 367
第五節(jié) 均相免疫酶標(biāo)技術(shù) 368
一、酶免疫增強(qiáng)測(cè)定技術(shù) 368
二、克隆酶供體免疫測(cè)定 369
參考文獻(xiàn) 369
第十五章 發(fā)光免疫分析技術(shù) 371
第一節(jié) 化學(xué)發(fā)光和生物發(fā)光 372
一、化學(xué)發(fā)光 372
二、生物發(fā)光 374
第二節(jié) 發(fā)光標(biāo)記物及其標(biāo)記方法 375
一、發(fā)光標(biāo)記物的選擇 375
二、發(fā)光標(biāo)記物常用的標(biāo)記方法及影響因素 376
第三節(jié) 發(fā)光免疫分析技術(shù)分類及發(fā)展前景 378
一、發(fā)光免疫分析技術(shù)分類 378
二、目前發(fā)光免疫分析方法的商品化產(chǎn)品常用發(fā)光原理及免疫反應(yīng)原理 381
第四節(jié) 展望 382
參考文獻(xiàn) 383
第十六章 免疫磁珠技術(shù) 384
第一節(jié) 磁性微球 384
一、磁性微球的組成 384
二、磁性微球的分類 385
三、磁性微球的特點(diǎn) 385
四、磁性微球的制備 385
第二節(jié) 免疫磁性微球 386
一、免疫磁性微球簡(jiǎn)介 386
二、免疫磁性微球的特點(diǎn) 386
三、免疫磁性微球的制備 387
四、免疫磁性微球的分類 387
第三節(jié) 免疫磁性分離技術(shù) 387
一、免疫磁性分離裝置 387
二、免疫磁珠的標(biāo)記方法 388
三、免疫磁珠分選的方法 389
四、細(xì)胞與磁珠的解離 389
第四節(jié) 免疫磁珠分選細(xì)胞實(shí)例 390
一、直標(biāo)法陽(yáng)性分選CD4＋T細(xì)胞 390
二、間標(biāo)法陰性分選CD4＋T細(xì)胞 391
第五節(jié) 免疫磁珠分選策略的選擇 392
一、靈活運(yùn)用陽(yáng)性分選和陰性分選 393
二、靈活運(yùn)用直接法和間接法分選 393
三、靈活運(yùn)用陰性分選后陽(yáng)性分選 393
四、雙陽(yáng)性細(xì)胞的分離 394
第六節(jié) 免疫磁珠在醫(yī)學(xué)上的應(yīng)用 395
一、細(xì)胞分離和純化 395
二、蛋白質(zhì)或多肽的分離與純化 395
三、核酸的分離和純化 397
四、微生物的檢測(cè) 397
五、靶向釋藥系統(tǒng)的載體 398
第七節(jié) 結(jié)語(yǔ) 398
參考文獻(xiàn) 398
第十七章 PCR和定量PCR 400
第一節(jié) PCR技術(shù)的基本原理和操作 400
一、基本原理 400
二、擴(kuò)增體系 401
三、反應(yīng)條件 402
四、PCR技術(shù)的基本操作 404
第二節(jié) 定量PCR技術(shù)的基本原理 416
一、傳統(tǒng)的終點(diǎn)定量PCR方法 417
二、實(shí)時(shí)定量PCR方法 418
第三節(jié) 實(shí)時(shí)熒光定量PCR的實(shí)驗(yàn)操作與優(yōu)化 425
一、基本實(shí)驗(yàn)步驟 425
二、實(shí)驗(yàn)的優(yōu)化 428
第四節(jié) 定量PCR儀及其發(fā)展 429
一、qGPCR儀的分類 429
二、qGPCR儀的性能指標(biāo) 431
第五節(jié) 實(shí)時(shí)定量PCR的主要應(yīng)用 432
一、DNA或RNA的定量檢測(cè)分析 433
二、基因表達(dá)差異分析 433
三、在醫(yī)學(xué)及藥物開(kāi)發(fā)中的檢測(cè)應(yīng)用 433
四、遺傳學(xué)分析中的應(yīng)用 433
參考文獻(xiàn) 433
第十八章 基因克隆和表達(dá)技術(shù) 435
第一節(jié) 常用基因克隆和表達(dá)載體的分類、特征和用途 436
一、常用克隆載體 437
二、常用表達(dá)載體的特征、應(yīng)用和選擇 438
第二節(jié) 哺乳動(dòng)物真核表達(dá)載體 444
一、哺乳動(dòng)物質(zhì)粒表達(dá)載體 444
二、哺乳動(dòng)物病毒表達(dá)載體 446
第三節(jié) 基因克隆和表達(dá)實(shí)施實(shí)例 452
一、質(zhì)粒載體的構(gòu)建 452
二、質(zhì)粒載體的原核表達(dá) 455
三、質(zhì)粒載體的真核表達(dá) 460
四、病毒載體的表達(dá) 464
第四節(jié) 外源基因的導(dǎo)入 473
一、常用基因轉(zhuǎn)染技術(shù) 474
二、基因轉(zhuǎn)染方法的選擇 477
三、基因轉(zhuǎn)染實(shí)施實(shí)例 479
參考文獻(xiàn) 485
第十九章 RNA干擾技術(shù) 486
第一節(jié) 概述 486
一、RNA干擾的機(jī)制 486
二、RNA干擾的應(yīng)用 487
第二節(jié) siRNA的設(shè)計(jì)與篩選原則 488
一、siRNA設(shè)計(jì)原則 488
二、siRNA干擾效率的檢測(cè)與篩選 488
第三節(jié) siRNA的制備 489
一、體外制備siRNA 489
二、體內(nèi)表達(dá)siRNA 489
第四節(jié) 影響RNAi效率的主要因素 490
一、轉(zhuǎn)染效率 490
二、siRNA的有效性 490
三、靶 mRNA和靶蛋白的穩(wěn)定性 491
四、RNAi操作細(xì)節(jié) 491
第五節(jié) RNAi應(yīng)用實(shí)例 491
一、siRNA的設(shè)計(jì)及合成 491
二、siRNA的轉(zhuǎn)染 492
三、RNAi干擾效率的檢測(cè) 492
參考文獻(xiàn) 494
第二十章 miRNA技術(shù) 495
第一節(jié) 概述 495
第二節(jié) miRNA序列數(shù)據(jù)庫(kù) 496
第三節(jié) miRNA的提取 497
第四節(jié) miRNA表達(dá)譜分析 498
一、miRNA表達(dá)譜的高通量分析方法 498
二、qRTGPCR法鑒定單個(gè)miRNA的表達(dá)差異 499
三、雜交法檢測(cè)miRNA的表達(dá) 500
第五節(jié) miRNA靶位點(diǎn)預(yù)測(cè) 500
第六節(jié) miRNA靶基因的實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證 501
第七節(jié) 發(fā)現(xiàn)病毒編碼 miRNA的一般策略 502
參考文獻(xiàn) 503
第二十一章 蛋白質(zhì)電泳和鑒定技術(shù) 504
第一節(jié) 蛋白質(zhì)電泳技術(shù) 504
一、SDSGPAGE 504
二、非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳 507
三、用于小分子肽分析的SDSGPAGE 509
四、蛋白質(zhì)的雙向電泳 509
第二節(jié) 蛋白質(zhì)凝膠電泳染色及檢測(cè)技術(shù) 511
一、考馬斯亮藍(lán)染色 511
二、SDSGPAGE銀染方法 512
三、蛋白質(zhì)凝膠電泳的熒光染色 513
四、聚丙烯酰胺凝膠上磷酸化蛋白質(zhì)的特異性熒光染色 513
五、糖基化蛋白和非糖基化蛋白的差異性熒光染色 514
參考文獻(xiàn) 515
第二十二章 蛋白質(zhì)印跡 516
第一節(jié) 概述 516
第二節(jié) Western印跡法 516
一、印跡樣品制備 517
二、SDSGPAGE 518
三、蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)膜 518
四、蛋白質(zhì)標(biāo)記 520
五、蛋白質(zhì)顯色 521
第三節(jié) 斑點(diǎn)印跡法 522
參考文獻(xiàn) 524
第二十三章 蛋白質(zhì)相互作用 525
第一節(jié) 酵母雙雜交系統(tǒng)的原理與應(yīng)用 525
一、酵母雙雜交系統(tǒng)分類 525
二、酵母雙雜交系統(tǒng)的應(yīng)用 527
第二節(jié) 酵母雙雜交系統(tǒng)應(yīng)用實(shí)例 527
第三節(jié) 免疫共沉淀原理與應(yīng)用 534
一、免疫共沉淀分類 534
二、免疫共沉淀應(yīng)用 535
三、免疫共沉淀技術(shù)局限性 535
第四節(jié) 免疫共沉淀應(yīng)用實(shí)例 535
第五節(jié) 印跡疊加和FarWestern印跡法原理與應(yīng)用 540
一、印跡疊加和FarWestern印跡法原理 540
二、印跡疊加和FarWestern應(yīng)用 541
第六節(jié) FarWestern印跡法應(yīng)用實(shí)例 542
第七節(jié) GSTpullGdown實(shí)驗(yàn) 543
第八節(jié) BIAcore技術(shù) 545
一、BIAcore技術(shù)原理 545
二、BIAcore芯片分類 545
三、BIAcore技術(shù)應(yīng)用 546
第九節(jié) BIAcore技術(shù)應(yīng)用實(shí)例 546
參考文獻(xiàn) 549
第二十四章 免疫學(xué)常規(guī)實(shí)驗(yàn)技術(shù) 550
第一節(jié) 概述 550
一、基本原理 550
二、抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn) 551
三、抗原抗體反應(yīng)的影響因素 553
第二節(jié) 經(jīng)典的抗原抗體反應(yīng) 554
一、凝集反應(yīng) 555
二、沉淀反應(yīng) 558
三、補(bǔ)體參與的試驗(yàn) 561
四、中和試驗(yàn) 564
第三節(jié) 免疫電泳技術(shù) 564
一、免疫電泳 565
二、對(duì)流免疫電泳 566
三、火箭免疫電泳 567
四、交叉電泳 568
五、放射免疫對(duì)流電泳 569
第四節(jié) 免疫微粒技術(shù) 570
一、膠乳微粒免疫檢測(cè)技術(shù) 570
二、免疫磁性微粒檢測(cè)技術(shù) 572
三、脂質(zhì)體微粒檢測(cè)技術(shù) 572
參考文獻(xiàn) 575
第二十五章 流式細(xì)胞術(shù) 576
第一節(jié) 流式分析 576
一、原理 576
二、基本操作 581
三、應(yīng)用 586
第二節(jié) 流式分選 596
一、原理 596
二、基本操作 598
三、應(yīng)用 602
參考文獻(xiàn) 605
第二十六章 細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期的檢測(cè) 607
第一節(jié) 細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)檢測(cè) 607
一、光鏡 608
二、熒光顯微鏡和共聚焦激光顯微鏡 608
三、電子顯微鏡 610
第二節(jié) 生化和分子生物學(xué)檢測(cè) 612
一、DNA梯狀圖譜 612
二、原位末端轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記技術(shù) 613
三、酶學(xué)檢測(cè) 616
第三節(jié) 流式細(xì)胞儀檢測(cè) 617
一、細(xì)胞周期時(shí)相分析和亞二倍體 617
二、AnnexinV結(jié)合PI或7GAAD染色 618
三、線粒體膜電位的分析 620
第四節(jié) 凋亡相關(guān)分子的檢測(cè) 621
一、Caspase檢測(cè) 621
二、細(xì)胞色素c釋放的檢測(cè) 623
第五節(jié) 結(jié)語(yǔ) 624
參考文獻(xiàn) 625
第二十七章 免疫組織化學(xué)技術(shù) 626
第一節(jié) 概述 626
一、免疫組織化學(xué)概念及基本原理 626
二、免疫組織化學(xué)分類 627
三、常用免疫組織化學(xué)方法 627
四、免疫組織化學(xué)技術(shù)的特點(diǎn) 628
第二節(jié) 免疫組織化學(xué)的關(guān)鍵技術(shù) 629
一、細(xì)胞和組織取材 629
二、細(xì)胞和組織標(biāo)本的固定 631
三、組織脫水、透明和浸蠟 632
四、組織切片技術(shù) 633
五、石蠟切片脫蠟至水 635
六、內(nèi)源酶及非特異性背景著色的消除 635
七、抗原修復(fù) 636
第三節(jié) 酶免疫組織化學(xué)染色 639
一、常用染色方法 639
二、染色結(jié)果判斷 645
三、免疫組織化學(xué)操作要點(diǎn)及技巧 646
第四節(jié) 熒光免疫組織化學(xué)技術(shù) 647
一、熒光免疫組織化學(xué)技術(shù)分類 648
二、常用的熒光素 648
三、標(biāo)本的制備 649
四、熒光抗體染色 650
五、免疫熒光染色影響因素 653
第五節(jié) 免疫金銀法 654
一、免疫金法 654
二、免疫金銀染色 655
三、彩色免疫金銀法 655
參考文獻(xiàn) 657
第二十八章 免疫細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)研究技術(shù) 658
第一節(jié) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的基本理論 658
一、G蛋白及其偶聯(lián)的效應(yīng)酶 658
二、蛋白激酶C 663
三、鈣信號(hào) 665
四、受體酪氨酸激酶及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 668
五、非受體酪氨酸激酶及其信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 671
六、脂筏與T細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 675
七、受體絲蘇氨酸蛋白激酶 678
八、磷脂酰肌醇G3G激酶、Akt與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo) 681
第二節(jié) 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)與調(diào)控研究技術(shù) 684
一、抗磷酸化氨基酸的蛋白質(zhì)印跡檢測(cè) 685
二、蛋白激酶和蛋白磷酸酶活性的檢測(cè) 686
三、凝膠電泳遷移率變動(dòng)分析技術(shù) 693
四、染色體免疫共沉淀技術(shù) 696
五、信號(hào)蛋白的泛素化分析技術(shù) 698
六、熒光素酶報(bào)道基因檢測(cè) 702
七、雙分子熒光互補(bǔ)技術(shù)研究活細(xì)胞中信號(hào)蛋白之間的相互作用 704
參考文獻(xiàn) 708
第二十九章 激光掃描共聚焦顯微鏡技術(shù) 709
第一節(jié) 激光掃描共聚焦顯微鏡成像原理及結(jié)構(gòu) 709
一、激光掃描共聚焦顯微鏡的成像原理 709
二、激光掃描共聚焦顯微鏡的基本結(jié)構(gòu) 710
第二節(jié) 激光掃描共聚焦顯微鏡成像應(yīng)用 712
一、熒光探針的選擇及標(biāo)記方法 712
二、激光掃描共聚焦顯微鏡在免疫學(xué)中的應(yīng)用 713
三、激光掃描共聚焦顯微鏡應(yīng)用舉例 717
參考文獻(xiàn) 728
第三十章 自身免疫病和炎癥性疾病動(dòng)物模型 729
第一節(jié) 概述 729
一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)計(jì)原則 729
二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)計(jì)注意事項(xiàng) 730
第二節(jié) 自身免疫性腦脊髓炎 730
一、應(yīng)用PLP和MBP蛋白或多肽誘導(dǎo)主動(dòng)性EAE 731
二、回輸MBP或PLP特異性淋巴細(xì)胞誘導(dǎo)被動(dòng)性EAE 733
第三節(jié) 自身免疫性甲狀腺炎模型 734
一、免疫法誘導(dǎo)自身免疫性甲狀腺炎 734
二、高碘誘導(dǎo)自身免疫性甲狀腺炎 737
三、自發(fā)性自身免疫性甲狀腺炎 737
第四節(jié) 系統(tǒng)性紅斑狼瘡動(dòng)物模型 737
第五節(jié) 膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎 738
一、小鼠膠原誘導(dǎo)性關(guān)節(jié)炎 738
二、小鼠關(guān)節(jié)炎的評(píng)定 739
第六節(jié) 炎癥性腸病動(dòng)物模型 741
一、化學(xué)藥物誘導(dǎo)炎癥性腸病模型 742
二、抗原誘導(dǎo)炎癥性腸病模型 746
三、CD4＋CD45RBhiT細(xì)胞誘導(dǎo)炎癥性腸病模型 747
四、轉(zhuǎn)基因和基因敲除炎癥性腸病模型 748
五、自發(fā)性炎癥性腸病模型 750
第七節(jié) 氣道高反應(yīng)性動(dòng)物模型 750
一、OVA誘導(dǎo)的呼吸道超敏反應(yīng) 751
二、使用 WBP檢測(cè)呼吸道過(guò)敏反應(yīng) 752
三、OVA致敏氣道誘導(dǎo)氣道超敏反應(yīng) 754
四、體外檢測(cè)氣道對(duì)電刺激的反應(yīng)性 754
第八節(jié) 糖尿病動(dòng)物模型 755
一、1型糖尿病模型 755
二、2型糖尿病模型 757
第九節(jié) 免疫性血小板減少性紫癜動(dòng)物模型 761
一、抗血小板血清誘導(dǎo)血小板減少性紫癜模型 761
二、異種血小板誘導(dǎo)血小板減少性紫癜模型 762
第十節(jié) 重癥肌無(wú)力模型 762
一、AchR蛋白誘導(dǎo)自身免疫性重癥肌無(wú)力模型 762
二、抗 AchR抗體誘導(dǎo)自身免疫性重癥肌無(wú)力模型 764
三、AchR多肽片段誘導(dǎo)自身免疫性重癥肌無(wú)力模型 765
四、轉(zhuǎn)基因小鼠自身免疫性重癥肌無(wú)力模型 765
參考文獻(xiàn) 766
第三十一章 感染性疾病動(dòng)物模型 768
第一節(jié) 小鼠利什曼原蟲感染模型 768
一、利什曼原蟲無(wú)鞭毛體的復(fù)蘇、感染、分離、純化和凍存 769
二、花生凝集素凝集實(shí)驗(yàn)純化利什曼原蟲后發(fā)育期前鞭毛體 770
三、皮膚感染利什曼原蟲的小鼠模型 771
第二節(jié) 小鼠弓形蟲感染模型 772
一、用人類包皮成纖維細(xì)胞擴(kuò)增T．gondii速殖子 773
二、ME49包囊種子庫(kù)的維持和保存 773
三、小鼠全身性急性T．gondii感染模型 774
四、小鼠慢性T．gondii腦炎模型 775
五、重癥聯(lián)合免疫缺陷小鼠T．gondii感染模型 775
六、T．gondii感染進(jìn)展和免疫應(yīng)答的評(píng)估 776
七、RTGPCR檢測(cè)T．gondii表面抗原G1 (SAGG1)和SAGG2的 mRNA 777
八、ELISA或RTGPCR法檢測(cè)細(xì)胞因子來(lái)評(píng)估T．gondii急性感染或慢性腦炎 777
第三節(jié) 小鼠巨細(xì)胞病毒感染模型 777
一、巨細(xì)胞病毒感染小鼠模型 778
二、小鼠胚胎原代成纖維細(xì)胞的制備 779
三、巨細(xì)胞病毒的制備與純化 780
四、唾液腺病毒的制備 781
五、用空斑形成實(shí)驗(yàn)測(cè)定巨細(xì)胞病毒滴度 782
第四節(jié) 小鼠李斯特菌感染模型 783
一、單核細(xì)胞增生性李斯特菌株感染小鼠模型 783
二、小鼠感染李斯特菌后的特異性和非特異性免疫反應(yīng)評(píng)估 784
參考文獻(xiàn) 786
第三十二章 移植排斥實(shí)驗(yàn)研究的小動(dòng)物模型 787
第一節(jié) 小鼠異位心臟移植模型 787
第二節(jié) 小鼠胰島 (細(xì)胞)移植模型 790
第三節(jié) 大鼠原位肝移植模型 792
參考文獻(xiàn) 794
第三十三章 腫瘤動(dòng)物模型 795
第一節(jié) 自發(fā)性腫瘤動(dòng)物模型 795
一、小鼠自發(fā)性乳腺癌模型 795
二、小鼠自發(fā)性白血病模型 796
三、其他小鼠自發(fā)性腫瘤模型 796
第二節(jié) 誘發(fā)性腫瘤模型 797
一、化學(xué)致癌物的選擇 797
二、化學(xué)致癌物的給藥途徑 797
三、常見(jiàn)腫瘤的誘發(fā)模型 798
四、誘發(fā)性腫瘤模型的注意事項(xiàng) 799
第三節(jié) 移植性腫瘤模型 799
一、移植性腫瘤模型的分類 799
二、受者動(dòng)物的選擇 800
三、腫瘤細(xì)胞的選擇 800
四、腫瘤移植部位與途徑的選擇 800
五、移植性腫瘤模型的注意事項(xiàng) 800
第四節(jié) 人體腫瘤移植入缺陷動(dòng)物 801
第五節(jié) 腫瘤轉(zhuǎn)移模型 802
一、B16GBL6小鼠黑色素瘤自發(fā)性肺轉(zhuǎn)移模型 802
二、B16GF10實(shí)驗(yàn)性肺轉(zhuǎn)移模型 803
三、Lewis肺癌自發(fā)性肺轉(zhuǎn)移模型 804
四、黑色素瘤脾內(nèi)移植肝轉(zhuǎn)移模型 804
五、小鼠 Hep肝癌經(jīng)脾內(nèi)移植肝轉(zhuǎn)移模型 805
第六節(jié) 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物腫瘤模型 806
第七節(jié) 腫瘤模型的評(píng)價(jià)與免疫細(xì)胞研究 806
一、腫瘤的大小和瘤重 806
二、荷瘤動(dòng)物的存活期 806
三、實(shí)體腫瘤組織內(nèi)單個(gè)核細(xì)胞的分離 807
參考文獻(xiàn) 808
第三十四章 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的建立 809
第一節(jié) 概述 809
一、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的概念及發(fā)展史 809
二、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物技術(shù) 809
第二節(jié) 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的外源目的基因的設(shè)計(jì)與構(gòu)建 810
第三節(jié) 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的常用轉(zhuǎn)基因方法 810
一、顯微注射法 811
二、逆轉(zhuǎn)錄病毒載體法 811
三、胚胎干細(xì)胞介導(dǎo)法 812
四、精子載體法 813
五、其他方法 813
第四節(jié) 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的鑒定 814
一、目的基因的整合鑒定 814
二、目的基因轉(zhuǎn)錄水平的鑒定 815
三、目的基因翻譯水平的鑒定 816
四、目的基因生物學(xué)效應(yīng)及轉(zhuǎn)基因動(dòng)物表型的鑒定 816
第五節(jié) 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的育種及建系 816
第六節(jié) 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的應(yīng)用 817
一、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物用于生命科學(xué)研究 817
二、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物用作研究人類疾病的發(fā)病及治療的實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ?817
三、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物作為生物反應(yīng)器生產(chǎn)藥用蛋白 818
四、轉(zhuǎn)基因動(dòng)物在異種器官移植研究中的應(yīng)用 818
參考文獻(xiàn) 818
第三十五章 基因敲除動(dòng)物的建立 820
第一節(jié) 概述 820
一、基因敲除動(dòng)物 820
二、基因敲除技術(shù) 820
第二節(jié) 基因敲除動(dòng)物的建立方法 820
一、利用基因同源重組進(jìn)行基因敲除 820
二、條件性基因敲除 823
三、誘導(dǎo)性基因敲除 825
四、基因捕獲法 826
五、轉(zhuǎn)座子系統(tǒng) 827
六、Hit和 Run法 827
七、雙置換法 827
第三節(jié) 結(jié)語(yǔ) 828
參考文獻(xiàn) 828
附錄 830
附錄A 常用緩沖液與試劑 830
一、常用酸堿 830
二、常用緩沖液 830
三、ELISA相關(guān)試劑 834
四、細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)試劑 835
五、常用染色試劑 838
六、固定試劑 839
七、蛋白相關(guān)試劑與緩沖液 840
八、顯色試劑 841
九、其他 842
附錄B 免疫學(xué)常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 844
一、常用小鼠品系 844
二、常用大鼠品系 845
三、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的管理、注射、采血、臟器摘除及解剖 846
四、淋巴細(xì)胞分離技術(shù) 849
參考文獻(xiàn) 851
附錄C 常用術(shù)語(yǔ) (中英文對(duì)照) 852
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