流式細(xì)胞術(shù)——原理、操作及應(yīng)用（第二版）
定 價(jià)：68 元
叢書(shū)名：生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)指南系列
- 作者：陳朱波，曹雪濤著
- 出版時(shí)間：2014/1/1
- ISBN：9787030390974
- 出 版 社：科學(xué)出版社
- 中圖法分類(lèi)：Q2-33
- 頁(yè)碼：236頁(yè)
- 紙張：膠版紙
- 版次：1
- 開(kāi)本：16K
流式細(xì)胞術(shù)——原理、操作及應(yīng)用(第二版)主要介紹流式細(xì)胞術(shù)的原理、操作及應(yīng)用，分為概述、流式細(xì)胞儀的原理、流式圖、流式細(xì)胞術(shù)的基本操作與技巧、流式分析術(shù)的應(yīng)用和流式分選術(shù)的應(yīng)用6個(gè)部分。概述部分介紹基本概念和幾款常見(jiàn)的流式細(xì)胞儀；原理部分具體介紹流式細(xì)胞儀的液流系統(tǒng)、光路系統(tǒng)、檢測(cè)分析系統(tǒng)和分選系統(tǒng)；流式圖部分主要介紹了流式通道、流式直方圖、流式散點(diǎn)圖和流式等高線圖；操作部分介紹了樣品制備、熒光素偶聯(lián)抗體及標(biāo)記、光電倍增管電壓設(shè)定、對(duì)照設(shè)置、補(bǔ)償調(diào)節(jié)、閾值設(shè)定、死細(xì)胞問(wèn)題處理、分選模式選擇、上樣速度控制、分選設(shè)門(mén)原則、分選基本步驟等內(nèi)容；流式分析術(shù)的應(yīng)用部分具體介紹了流式細(xì)胞術(shù)在免疫學(xué)方面的應(yīng)用，并且擴(kuò)展到基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和生物學(xué)方面的應(yīng)用；流式分選術(shù)的應(yīng)用部分闡述了不同條件下流式分選的策略選擇和注意事項(xiàng)，同時(shí)還介紹了各種干細(xì)胞包括腫瘤干細(xì)胞等的流式分選方法。
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深入淺出，通俗易懂；操作的全面性；理論聯(lián)系實(shí)踐；加強(qiáng)了流式分選的相關(guān)內(nèi)容。
曹雪濤，中國(guó)工程院院士，現(xiàn)任中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院院長(zhǎng)、北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院校長(zhǎng)。中國(guó)免疫學(xué)會(huì)理事長(zhǎng)，醫(yī)學(xué)免疫學(xué)國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室主任，全軍免疫與基因治療重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室主任，“長(zhǎng)江計(jì)劃”特聘教授，國(guó)家免疫學(xué)重點(diǎn)學(xué)科帶頭人，國(guó)家杰出青年科學(xué)基金獲得者，國(guó)家973免疫學(xué)項(xiàng)目首席科學(xué)家，863計(jì)劃醫(yī)藥生物技術(shù)領(lǐng)域?qū)＜遥瑖?guó)家自然科學(xué)基金免疫學(xué)重大項(xiàng)目和創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目負(fù)責(zé)人，國(guó)務(wù)院學(xué)位評(píng)議委員會(huì)學(xué)科評(píng)議組委員。
目錄
序 i
第二版前言 v
第一版前言 vii
1 概述 1
1.1 流式細(xì)胞術(shù)基本概念 2
1.2 分析型流式細(xì)胞儀介紹 5
1.3 分選型流式細(xì)胞儀介紹 9
參考文獻(xiàn) 13
2 流式細(xì)胞儀的原理 14
2.1 液流系統(tǒng) 15
2.2 光路系統(tǒng) 18
2.3 檢測(cè)分析系統(tǒng) 28
2.4 分選系統(tǒng) 32
參考文獻(xiàn) 37
3 流式圖 39
3.1 流式通道 40
3.2 流式直方圖 41
3.3 流式散點(diǎn)圖 45
3.4 流式等高線圖 48
參考文獻(xiàn) 50
4 流式細(xì)胞術(shù)的基本操作與技巧 51
4.1 樣品制備 52
4.1.1 獨(dú)立細(xì)胞樣品制備 52
4.1.2 免疫器官樣品制備 54
4.1.3 實(shí)體臟器樣品制備 55
4.2 熒光素偶聯(lián)抗體及其標(biāo)記方法 56
4.2.1 熒光素 57
4.2.2 熒光素偶聯(lián)抗體 61
4.2.3 樣品封閉 62
4.2.4 熒光素偶聯(lián)抗體標(biāo)記 64
4.3 光電倍增管電壓設(shè)定 66
4.4 對(duì)照的設(shè)置 71
4.4.1 陰性對(duì)照的設(shè)置 71
4.4.2 FMO對(duì)照 73
4.4.3 陽(yáng)性對(duì)照的設(shè)置 74
4.5 補(bǔ)償調(diào)節(jié) 75
4.5.1 補(bǔ)償調(diào)節(jié)的原理 75
4.5.2 調(diào)節(jié)補(bǔ)償?shù)木唧w方法 76
4.5.3 三色和四色分析補(bǔ)償調(diào)節(jié)方法 79
4.5.4 影響補(bǔ)償大小的因素 82
4.6 閾值設(shè)定 84
4.7 流式分析中的死細(xì)胞問(wèn)題 85
4.7.1 減少樣品中死細(xì)胞比例的方法 86
4.7.2 流式分析時(shí)區(qū)分死細(xì)胞和活細(xì)胞的方法 86
4.8 流式分選模式選擇 91
4.8.1 純化模式 92
4.8.2 富集模式 93
4.8.3 單細(xì)胞模式 93
4.9 上樣速度控制 94
4.9.1 流式分析速度控制 95
4.9.2 流式分選速度控制 95
4.10 分選設(shè)門(mén)基本原則 97
4.11 流式分選基本步驟 99
參考文獻(xiàn) 100
5 流式分析術(shù)的應(yīng)用 102
5.1 細(xì)胞群比例測(cè)定 103
5.2 表型測(cè)定 109
5.3 檢測(cè)細(xì)胞因子 115
5.3.1 胞內(nèi)染色法檢測(cè)細(xì)胞因子 116
5.3.2 胞內(nèi)染色法與ELISA法比較 123
5.3.3 CBA法測(cè)定細(xì)胞因子 125
5.3.4 CBA法與ELISA法比較 127
5.4 檢測(cè)細(xì)胞增殖 128
5.4.1 相對(duì)計(jì)數(shù)法 129
5.4.2 示蹤染料標(biāo)記法 133
5.4.3 BrdU和EdU摻入法 138
5.4.4 其他方法 141
5.5 檢測(cè)細(xì)胞凋亡 142
5.5.1 annexin V/PI雙染色法 142
5.5.2 SYTO/PI雙染色法 145
5.5.3 細(xì)胞DNA含量分析法檢測(cè)細(xì)胞凋亡 146
5.5.4 線粒體損傷檢測(cè)法 147
5.5.5 活化的caspase-3檢測(cè)法 151
5.5.6 熒光素偶聯(lián)的caspase抑制劑(FLICA)標(biāo)記法 151
5.5.7 甲酰胺誘導(dǎo)ssDNA單抗檢測(cè)法 152
5.5.8 TUNEL法 153
5.6 檢測(cè)細(xì)胞周期 154
5.6.1 非特異性核酸熒光染料標(biāo)記法 154
5.6.2 特異性細(xì)胞周期調(diào)節(jié)蛋白檢測(cè)法 159
5.7 檢測(cè)細(xì)胞殺傷能力 160
5.8 檢測(cè)細(xì)胞吞噬功能 166
5.9 檢測(cè)胞內(nèi)活化的激酶 168
5.10 檢測(cè)細(xì)胞自噬 169
5.11 檢測(cè)基因表達(dá) 171
5.11.1 GFP報(bào)告基因系統(tǒng) 171
5.11.2 lacZ報(bào)告基因系統(tǒng) 172
5.11.3 β-內(nèi)酰胺酶報(bào)告基因系統(tǒng) 173
5.11.4 新型膜結(jié)合型報(bào)告分子系統(tǒng) 174
5.12 檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)兩種蛋白質(zhì)的直接結(jié)合 174
5.12.1 熒光共振能量轉(zhuǎn)移結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)兩種蛋白質(zhì)的直接結(jié)合 174
5.12.2 雙分子熒光互補(bǔ)結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)兩種蛋白質(zhì)的直接結(jié)合 176
5.13 微生物學(xué)中的應(yīng)用 177
5.13.1 熒光素偶聯(lián)抗體直接檢測(cè)法 178
5.13.2 抗體結(jié)合人工熒光微球直接檢測(cè)法 179
5.13.3 微生物活性流式檢測(cè) 179
5.13.4 人工微球熒光免疫試驗(yàn)檢測(cè)抗體 180
5.13.5 熒光原位雜交流式檢測(cè)法 181
5.13.6 PCR免疫微珠法 182
5.13.7 原位PCR雜交流式檢測(cè)法 182
5.14 檢測(cè)鈣相關(guān)分子 183
5.14.1 檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)游離的鈣離子水平 183
5.14.2 檢測(cè)鈣蛋白酶活性 184
5.14.3 檢測(cè)細(xì)胞膜鈣泵活性 186
5.15 表觀遺傳學(xué)中的應(yīng)用 188
5.15.1 ChIP-on-beads法 189
5.15.2 檢測(cè)細(xì)胞水平組蛋白修飾情況 191
5.16 檢測(cè)縫隙連接介導(dǎo)的細(xì)胞通訊 191
5.17 檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)pH值和鈉氫轉(zhuǎn)運(yùn)體活性 194
5.17.1 檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)pH值 194
5.15.2 檢測(cè)鈉氫轉(zhuǎn)運(yùn)體活性 196
5.18 其他應(yīng)用 197
5.18.1 檢測(cè)活性氧簇 197
5.18.2 檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)游離的鋅離子水平 198
5.18.3 檢測(cè)端粒長(zhǎng)度 199
5.18.4 檢測(cè)脂筏結(jié)合蛋白 201
引文目錄 203
參考文獻(xiàn) 207
6 流式分選術(shù)的應(yīng)用 211
6.1 流式分選與磁性分選 212
6.2 流式分選獨(dú)立群體細(xì)胞 214
6.3 流式分選非獨(dú)立細(xì)胞群體 216
6.4 流式分選低比例細(xì)胞群體 220
6.4.1 強(qiáng)勢(shì)細(xì)胞群的輻射影響 220
6.4.2 流式分選結(jié)合磁性分選 221
6.4.3 二次分選法 222
6.5 流式分選干細(xì)胞 224
6.5.1 流式分選造血干細(xì)胞 224
6.5.2 流式分選側(cè)群干細(xì)胞 229
6.5.3 流式分選間充質(zhì)干細(xì)胞 231
6.5.4 流式分選腫瘤干細(xì)胞 232
參考文獻(xiàn) 235
1概述
流式細(xì)胞術(shù)(flow cytometry)是20世紀(jì)60年代后期開(kāi)始發(fā)展起來(lái)的利用流式細(xì)胞儀(flow cytometer)快速定量分析細(xì)胞群的物理化學(xué)特征以及根據(jù)這些物理化學(xué)特征精確分選細(xì)胞的新技術(shù)，主要包括流式分析和流式分選兩部分。流式細(xì)胞儀通過(guò)接收激光照射液流內(nèi)細(xì)胞后的散射光信號(hào)和熒光信號(hào)反映細(xì)胞的物理化學(xué)特征，如細(xì)胞的大小、顆粒度和抗原分子的表達(dá)情況等。流式細(xì)胞儀的出現(xiàn)和流式細(xì)胞術(shù)的發(fā)展是多學(xué)科領(lǐng)域共同發(fā)展的結(jié)晶，其中涉及細(xì)胞與分子生物學(xué)和生物技術(shù)、單克隆抗體技術(shù)、激光技術(shù)、熒光化學(xué)、光電子物理、流體力學(xué)、計(jì)算機(jī)技術(shù)等。
流式細(xì)胞術(shù)主要應(yīng)用于生命科學(xué)的基礎(chǔ)研究，尤其是免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)。80年代后期開(kāi)始應(yīng)用于臨床，應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定外周血CD4 T細(xì)胞的數(shù)量能用于監(jiān)測(cè)HIV感染者疾病的進(jìn)展，開(kāi)啟了流式細(xì)胞術(shù)應(yīng)用于臨床的新紀(jì)元。隨后，利用流式分選干細(xì)胞過(guò)繼回輸用于疾病的治療，進(jìn)一步拓展了流式細(xì)胞術(shù)的臨床應(yīng)用�，F(xiàn)在，流式細(xì)胞術(shù)還能輔助多種疾病的診斷，尤其是白血病的診斷和分型。
?1.1??流式細(xì)胞術(shù)基本概念
1. 原理
特定波長(zhǎng)的激光束直接照射到高壓驅(qū)動(dòng)的液流內(nèi)的細(xì)胞，產(chǎn)生的光信號(hào)被多個(gè)接收器接收，一個(gè)是在激光束直線方向上接收到的散射光信號(hào)(前向角散射)，其他是在激光束垂直方向上接收到的光信號(hào)，包括散射光信號(hào)(側(cè)向角散射)和熒光信號(hào)。液流中懸浮的直徑從0.2~150μm的細(xì)胞或顆粒能夠使激光束發(fā)生散射，細(xì)胞上結(jié)合的熒光素被激光激發(fā)后能夠發(fā)射熒光。散射光信號(hào)和熒光信號(hào)被相應(yīng)的接收器接收，根據(jù)接收到的信號(hào)的強(qiáng)弱波動(dòng)就能反映出每個(gè)細(xì)胞的物理化學(xué)特征。
2. 流式細(xì)胞術(shù)的三大要素
流式細(xì)胞術(shù)有三大要素，分別為流式細(xì)胞儀、樣品細(xì)胞和熒光染料或者熒光素偶聯(lián)抗體。流式細(xì)胞術(shù)是在流式細(xì)胞儀上操作的，流式細(xì)胞儀根據(jù)其功能的不同可以分為分析型流式細(xì)胞儀和分選型流式細(xì)胞儀，前者只能流式分析，不能分選純化目標(biāo)細(xì)胞，后者能夠同時(shí)進(jìn)行流式分析和流式分選。
流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)的對(duì)象是細(xì)胞，而且是呈獨(dú)立狀態(tài)的懸浮于液體中的細(xì)胞，即單細(xì)胞懸液。流式細(xì)胞術(shù)不能直接檢測(cè)組織塊中的細(xì)胞，要檢測(cè)臟器或組織中的細(xì)胞，必須先用各種方法將臟器或組織制備成單細(xì)胞懸液，然后標(biāo)記上熒光素偶聯(lián)抗體，才能被流式細(xì)胞儀檢測(cè)。
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