醫(yī)學(xué)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵��?br /><br>（一）醫(yī)學(xué)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)課目的
<br>（1）加深對(duì)理論知識(shí)的理解和運(yùn)用。
<br>（2）學(xué)習(xí)和掌握醫(yī)學(xué)免疫學(xué)的基本操作技術(shù)。
<br>（3）培養(yǎng)學(xué)生從事科學(xué)實(shí)驗(yàn)的能力，即觀察記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果、整理分析實(shí)驗(yàn)資料、綜合書寫實(shí)驗(yàn)報(bào)告和論文的能力。
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<br>（4）培養(yǎng)學(xué)生嚴(yán)謹(jǐn)求實(shí)的科學(xué)作風(fēng)，獨(dú)立分析和解決問題的能力，相互幫助和團(tuán)結(jié)協(xié)作的精神。
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<br>（二）醫(yī)學(xué)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)課要求
<br>（1）嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室規(guī)則。
<br>（2）實(shí)驗(yàn)前做好預(yù)習(xí)，明確實(shí)驗(yàn)?zāi)康�、原理、主要方法、�?shí)驗(yàn)步驟和注意事項(xiàng)，做到心中有數(shù)，提高實(shí)驗(yàn)的成功率。
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<br>（3）在實(shí)驗(yàn)時(shí)，對(duì)要求動(dòng)手操作的實(shí)驗(yàn)應(yīng)按指導(dǎo)所列的步驟依次進(jìn)行，仔細(xì)觀察并認(rèn)真記錄實(shí)驗(yàn)結(jié)果或繪圖；多人同做一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)時(shí)，要注意分工協(xié)作、密切配合；對(duì)示教的實(shí)驗(yàn)要仔細(xì)觀察，并應(yīng)聯(lián)系有關(guān)理論積極思考；實(shí)驗(yàn)中注意科學(xué)合理地分配和運(yùn)用時(shí)間。
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<br>（4）實(shí)驗(yàn)完畢，應(yīng)認(rèn)真分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果，探討實(shí)驗(yàn)原理，得出可信的結(jié)論。若實(shí)驗(yàn)結(jié)果與理論不符合時(shí)，要加以分析討論，以逐步提高自己的科學(xué)思維能力。實(shí)驗(yàn)課后，須按時(shí)按要求遞交實(shí)驗(yàn)報(bào)告。
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<br>（5）防止發(fā)生各種事故。
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<br>醫(yī)學(xué)免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)室的實(shí)驗(yàn)對(duì)象大多是病原微生物或含病原微生物的血、尿、糞便、痰液及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物等，有傳染的危險(xiǎn)。要求同學(xué)們進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室必須嚴(yán)格遵守以下規(guī)則：
<br>（1）進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室必須先穿實(shí)驗(yàn)服，只帶必要的實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)、書籍和文具進(jìn)入，實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)、書籍和文具應(yīng)放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)下的抽屜里，其他個(gè)人物品一律不得帶入實(shí)驗(yàn)室。
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<br>（2）實(shí)驗(yàn)室內(nèi)禁止飲食、吸煙、用嘴濕潤(rùn)鉛筆或標(biāo)簽等行為。
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<br>（3）在操作含病原微生物的實(shí)驗(yàn)時(shí)，要堅(jiān)持無菌操作，既要防止標(biāo)本被污染，更要防止標(biāo)本中的病原微生物感染人體或污染環(huán)境。
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<br>（4）用過的吸管、滴管、試管、玻片等器材，應(yīng)放在指定的地方或含消毒液的容器內(nèi)，不得放在桌面上或水池內(nèi)，亦不得將帶病原微生物的液體傾入水槽。
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<br>（5）酒精燈不可互相點(diǎn)燃，以防發(fā)生意外。
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<br>（6）若發(fā)生割破手指、菌液進(jìn)入口、眼，或遇帶菌材料破損，污染環(huán)境、物品等事故時(shí)，應(yīng)立即報(bào)告老師，及時(shí)進(jìn)行預(yù)防處理。
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<br>（7）不可擅自搬動(dòng)示教、實(shí)驗(yàn)器材或室內(nèi)設(shè)施。愛護(hù)公物，節(jié)約使用實(shí)驗(yàn)材料。如有損壞，應(yīng)立即向指導(dǎo)教師報(bào)告，并主動(dòng)在破損物品登記本上登記，某些物品需按規(guī)定酌情
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<br>（9）值日生負(fù)責(zé)整理清潔實(shí)驗(yàn)室（包括桌面、地面、實(shí)驗(yàn)設(shè)備等），然后關(guān)好水、電、門、窗，脫衣洗手后離室。
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<br>賠償（。8）實(shí)驗(yàn)完畢，應(yīng)清理桌面，把用過的物品放回原處（如顯微鏡、染色液、擦鏡紙、香柏油、火柴等）。
<br>（10）未經(jīng)許可，不得將實(shí)驗(yàn)室內(nèi)任何物品帶出室外。
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<br>抗原抗體反應(yīng)（antigenantibodyreaction）指抗原與相應(yīng)的抗體在體內(nèi)或體外發(fā)生的特異性反應(yīng)。抗原與抗體發(fā)生結(jié)合反應(yīng)的物質(zhì)基礎(chǔ)是抗原表位與抗體的高變區(qū)（hypervariableregion，HVR）之間的結(jié)構(gòu)互補(bǔ)性，二者相互結(jié)合，在一定條件下出現(xiàn)可見反應(yīng)。
<br>在抗原抗體反應(yīng)中，可用已知抗體檢測(cè)未知抗原，也可用已知抗原檢測(cè)未知抗體，并可根據(jù)需要選擇定性或定量的測(cè)定方法。由于抗體主要存在于血清中，在檢測(cè)樣品時(shí)一般采用血清進(jìn)行試驗(yàn)，故體外的抗原抗體反應(yīng)又稱為血清學(xué)試驗(yàn)。
<br>（一）抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)
<br>1.
<br>特異性　一種抗原一般只能與由它刺激機(jī)體所產(chǎn)生的抗體結(jié)合，這種抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的專一性即特異性�？乖�抗體反應(yīng)具有高度的特異性。
<br>可逆性　抗原與抗體的結(jié)合為非共價(jià)的可逆結(jié)合，結(jié)合后形成的復(fù)合物在一定條件下可以解離，解離后的抗原和抗體仍保持原有的性質(zhì)。
<br>2.
<br>比例性與可見性　體外抗原抗體反應(yīng)中，確定抗原抗體的最適比例十分重要。天然抗原分子表面一般有多個(gè)抗原表位，是多價(jià)。而單體的抗體分子（如IgG）是兩價(jià)。在抗原如果不考慮抗原抗體的數(shù)量比例，則很可能出現(xiàn)抗原或抗體過剩，
<br>3.
<br>抗體反應(yīng)中，
<br>結(jié)果只有小
<br>分子的復(fù)合物形成，F(xiàn)ab分別結(jié)合兩個(gè)抗原分子，相互交叉連接成網(wǎng)格狀復(fù)合體，此時(shí)有明顯的反應(yīng)物（沉淀物或凝集物）形成，肉眼可見（圖1-1）。
<br>不能被肉眼觀察到。當(dāng)抗原抗體的數(shù)量比例恰當(dāng)時(shí)，抗體分子的兩個(gè)
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<br>圖1-1　抗原抗體反應(yīng)的比例性和可見性
<br>（二）抗原抗體反應(yīng)的影響因素
<br>1.
<br>電解質(zhì)　抗原與抗體結(jié)合后由親水性變?yōu)槭杷�性，如有適當(dāng)濃度電解質(zhì)存在，可促進(jìn)其電荷丟失，形成大分子復(fù)合物。因此免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)中常用生理鹽水或含鹽緩沖液作為稀
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<br>釋液或反應(yīng)液。
<br>溫度　在一定溫度范圍內(nèi)（15～40℃），升高溫度可促進(jìn)抗原抗體分子的碰撞，加速可見反應(yīng)的出現(xiàn)。一般最適溫度為37℃。
<br>2.3.
<br>酸堿度　適宜的pH是抗原抗體反應(yīng)的重要條件，過酸或過堿都影響抗原抗體分子的性質(zhì)。最適酸堿度為pH6～8。
<br>（三）抗原抗體反應(yīng)的類型
<br>根據(jù)抗原的性質(zhì)、出現(xiàn)結(jié)果的現(xiàn)象、參與反應(yīng)的成分不同，可將抗原抗體反應(yīng)分為凝集反應(yīng)、沉淀反應(yīng)、補(bǔ)體參加的反應(yīng)、采用標(biāo)記物的抗原抗體反應(yīng)等。
<br>第一節(jié)　凝集反應(yīng)
<br>凝集反應(yīng)（agglutinationreaction）是顆粒性抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合，在一定條件下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集物現(xiàn)象，稱為凝集反應(yīng)。凝集反應(yīng)包括直接凝集反應(yīng)和間接凝集反應(yīng)。
<br>Ⅰ.直接凝集反應(yīng)
<br>顆粒性抗原（細(xì)菌或紅細(xì)胞等）與特異性抗體直接結(jié)合，當(dāng)比例合適時(shí)，出現(xiàn)的凝集現(xiàn)象，稱為直接凝集反應(yīng)（directagglutinati-onreactions）（圖1-2）。
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<br>圖1-2　直接凝集反應(yīng)
<br>實(shí)驗(yàn)方法可分玻片法和試管法兩種。玻片凝集試驗(yàn)一般用作定性檢測(cè)，常用于病原菌的鑒定及分型、人類ABO血型的鑒定等；試管凝集試驗(yàn)常用于定量測(cè)定，如診斷傷寒、副傷寒的肥達(dá)試驗(yàn)等。
<br>一、玻片凝集試驗(yàn)
<br>實(shí)驗(yàn)一　痢疾桿菌的血清學(xué)鑒定【實(shí)驗(yàn)原理】
<br>已知的抗細(xì)菌抗體（志賀菌屬多價(jià)診斷血清）與待檢細(xì)菌反應(yīng)，如兩者為相對(duì)應(yīng)的抗原抗體，則直接結(jié)合出現(xiàn)凝集。可定性檢測(cè)細(xì)菌種類。
<br>【實(shí)驗(yàn)材料】
<br>待檢細(xì)菌（痢疾桿菌）18～24h培養(yǎng)物、志賀菌屬多價(jià)診斷血清、生理鹽水、載玻片、接種環(huán)、酒精燈等。
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<br>【實(shí)驗(yàn)方法】
<br>（1）取一張潔凈的載玻片，用記號(hào)筆劃分為二格。
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<br>（2）以無菌取材法于左側(cè)加2接種環(huán)診斷血清，右側(cè)加2接種環(huán)生理鹽水。
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<br>（3）左、右側(cè)分別加入挑取的待檢細(xì)菌。
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<br>（4）輕搖玻片1～2min，觀察結(jié)果。
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<br>【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】
<br>首先觀察鹽水對(duì)照側(cè)，呈均勻混濁狀；再觀察試驗(yàn)側(cè)，出現(xiàn)乳白色凝集塊者即為陽(yáng)性；對(duì)照側(cè)及試驗(yàn)側(cè)均呈均勻混濁，不出現(xiàn)凝集為陰性；如對(duì)照側(cè)及試驗(yàn)側(cè)均出現(xiàn)凝集，為自凝。
<br>實(shí)驗(yàn)二　ABO血型鑒定【實(shí)驗(yàn)原理】
<br>血型是根據(jù)紅細(xì)胞表面血型抗原的種類而判定的。人類ABO血型系統(tǒng)即將紅細(xì)胞上有A抗原者稱A型，有B抗原者稱B型，同時(shí)存在A、B抗原者稱AB型，無A、B抗原者稱O型。據(jù)此，分別用已知標(biāo)準(zhǔn)含抗A抗體和含抗B抗體的試劑與受試者紅細(xì)胞作凝集反應(yīng)，便可判定受試者的血型。
<br>【實(shí)驗(yàn)材料】
<br>玻片、已知標(biāo)準(zhǔn)抗A血型定型試劑和抗B血型定型試劑、刺血針、酒精棉球、無菌干棉球。
<br>【實(shí)驗(yàn)方法】
<br>（1）取潔凈玻片一張用記號(hào)筆劃分兩個(gè)區(qū)，標(biāo)明A、B。
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<br>（2）在A、B兩側(cè)分別滴1滴已知標(biāo)準(zhǔn)抗A血型定型試劑和抗B血型定型試劑。
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<br>（3）酒精棉球消毒被檢查者的耳垂，用刺血針刺血。
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<br>（4）取少量血液分別與已知標(biāo)準(zhǔn)抗A血型定型試劑、抗B血型定型試劑混勻。
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<br>（5）搖轉(zhuǎn)玻片數(shù)次，靜置數(shù)分鐘，觀察結(jié)果。
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<br>【實(shí)驗(yàn)結(jié)果】
<br>實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1-1。
<br>表1-1　ABO血型鑒定的實(shí)驗(yàn)結(jié)果
<br>抗A血型定型試劑抗B血型定型試劑血型判定
<br>--O型+-A型-+B型++AB型
<br>注：“+”表示凝集現(xiàn)象；“-”表示未出現(xiàn)凝集。
<br>【注意事項(xiàng)】
<br>（1）一般在室溫20～24℃內(nèi)進(jìn)行試驗(yàn)，37℃條件，可使反應(yīng)減弱。
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<br>（2）所用器材必須干燥清潔，為避免交叉污染，建議使用一次性器材。血型定型試劑從
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<br>冰箱取出后，應(yīng)待其平衡至室溫后再用，用畢后應(yīng)盡快放回冰箱保存。
<br>（3）反應(yīng)時(shí)間不能少于10min，否則較弱凝集不能出現(xiàn)，造成假陰性。
<br>（4）對(duì)含有較多冷凝集素的受檢者，在鑒定血型時(shí)往往被誤定為AB型，遇到此種情況，需先用37℃生理鹽水洗滌受檢紅細(xì)胞2～3次，以去除吸附在紅細(xì)胞上的冷凝集素，然后再進(jìn)行鑒定。
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<br>（5）血型定型試劑如出現(xiàn)渾濁或變色，則不能使用；若開瓶使用時(shí)間較長(zhǎng)，最好用已知A、B、O血型紅細(xì)胞進(jìn)行檢查，判斷結(jié)果是否與已知血型相符，以防因制品污染、變質(zhì)失效等原因造成鑒定錯(cuò)誤。
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<br>二、試管凝集試驗(yàn)
<br>實(shí)驗(yàn)三　血清抗體效價(jià)的測(cè)定【實(shí)驗(yàn)原理】
<br>試管凝集反應(yīng)是一種定量試驗(yàn)，用定量的顆粒性抗原懸液與一系列稀釋度的待檢血清混合，根據(jù)每管內(nèi)顆�？乖�凝集程度，以判定待檢血清中有無相應(yīng)抗體及其效價(jià)。如用已知傷寒沙門菌H（或O）菌液檢測(cè)患者血清中有無相應(yīng)抗傷寒桿菌H（或O）抗體及其效價(jià)。
<br>【實(shí)驗(yàn)材料】
<br>1∶10稀釋的待測(cè)患者血清、傷寒沙門菌H（或O）菌液、生理鹽水、小試管、吸管、水浴箱。
<br>【實(shí)驗(yàn)方法】
<br>（1）取7支小試管，排成一排，依次編號(hào)，每管加入0.5ml生理鹽水。
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<br>（2）吸取0.5ml待測(cè)患者血清（1∶10）加入1號(hào)管中，反復(fù)吹吸三次，充分混勻，吸出
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<br>0.5ml加入2號(hào)管中，同法混勻，吸出0.5ml加入3號(hào)管，依次類推至6號(hào)管，吸出0.5ml棄之，7號(hào)管為對(duì)照。
<br>（3）從7號(hào)管開始依次向前每管加入傷寒沙門菌H菌液0.5ml，此時(shí)試管中血清的稀釋度又遞增了一倍。
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<br>（4）菌液加畢，振搖試管，充分混勻，置37℃或室溫24h，觀察結(jié)果（表1-2）。拿出時(shí)，切勿振蕩。
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