生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教程
定 價(jià)：35 元
叢書名：普通高等教育“十二五”規(guī)劃教材
- 作者：朱月春，楊銀峰主編
- 出版時(shí)間：2015/1/1
- ISBN：9787030427229
- 出 版 社：科學(xué)出版社
- 中圖法分類：Q5-33
- 頁碼：232
- 紙張：膠版紙
- 版次：1
- 開本：16K
《生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教程》為適應(yīng)高等醫(yī)學(xué)院校的實(shí)驗(yàn)教學(xué)改革和發(fā)展需要而編寫。分為生化與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)（包括基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn)、綜合性實(shí)驗(yàn)和創(chuàng)新設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)）與生化與分子生物學(xué)基本技術(shù)兩篇。在實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目的設(shè)置上，除了蛋白質(zhì)、核酸的分離純化分析、酶學(xué)、糖類、脂類分析等基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)外，大部分的綜合性實(shí)驗(yàn)和創(chuàng)新設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)則是來源于教師們的科研項(xiàng)目。在實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)理論方面，增加了近年來常用的RNA干擾等較新的技術(shù)。每一篇有英文小結(jié)，附錄中有常用儀器、技術(shù)等中英文詞匯對照表�！渡锘瘜W(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教程》內(nèi)容較新穎，體系較完整，不同層次實(shí)驗(yàn)的培養(yǎng)目標(biāo)有所側(cè)重，便于基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)等專業(yè)不同層次學(xué)生選擇。
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目錄
前言
第一篇 生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)
第一章 基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn) 3
實(shí)驗(yàn)1 蛋白質(zhì)的呈色反應(yīng)、沉淀現(xiàn)象觀察及等電點(diǎn)的測定 3
實(shí)驗(yàn)2 蛋白質(zhì)含量的測定 6
實(shí)驗(yàn)3 丙二酸對琥珀酸脫氫酶的競爭性抑制作用 10
實(shí)驗(yàn)4 紅細(xì)胞葡糖-6-磷酸脫氫酶活性測定 12
實(shí)驗(yàn)5 血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶活性測定（紫外速率法及改良穆氏法） 17
實(shí)驗(yàn)6 糖化血紅蛋白的測定 21
實(shí)驗(yàn)7 血清脂蛋白瓊脂糖凝膠電泳 23
實(shí)驗(yàn)8 血紅蛋白的醋酸纖維薄膜電泳 25
實(shí)驗(yàn)9 血糖測定 27
實(shí)驗(yàn)10 胰島素、腎上腺素對家兔血糖濃度的影響 31
實(shí)驗(yàn)11 血清總膽固醇測定 33
實(shí)驗(yàn)12 質(zhì)粒DNA的提取、酶切與鑒定 37
實(shí)驗(yàn)13 酵母RNA的成分鑒定 40
實(shí)驗(yàn)14 PCR擴(kuò)增G6PD基因外顯子11-12片段 41
實(shí)驗(yàn)15 尿中酮體的檢出 43
實(shí)驗(yàn)16 血清尿素氮測定（二乙酰一肟法） 44
第二章 綜合性實(shí)驗(yàn) 47
實(shí)驗(yàn)17 真核細(xì)胞基因組DNA的提取、定量和純度測定 47
實(shí)驗(yàn)18 小鼠基因組DNA的Southern blotting分析 49
實(shí)驗(yàn)19 小鼠腦組織總RNA提取與RT-PCR獲取真核基因片段 54
實(shí)驗(yàn)20 pMD19-G6PD重組子的藍(lán)白斑篩選及酶切鑒定 59
實(shí)驗(yàn)21 pThioHis (A)-G6PD重組表達(dá)質(zhì)粒的鑒定 63
實(shí)驗(yàn)22 G6PD重組酶的誘導(dǎo)表達(dá)、分離及比活性測定 66
實(shí)驗(yàn)23 ATP、ADP和NADPH對G6PD酶促反應(yīng)的影響 70
實(shí)驗(yàn)24 小鼠PKC基因的克隆、鑒定及其6His融合蛋白的大腸桿菌表達(dá)和純化 76
實(shí)驗(yàn)25 SDS-PAGE測定蛋白質(zhì)的表觀分子量 83
實(shí)驗(yàn)26 小鼠血清IgG的Western blotting分析 87
實(shí)驗(yàn)27 血紅蛋白的等電聚焦分離及其等電點(diǎn)測定 94
實(shí)驗(yàn)28 醋酸纖維薄膜電泳技術(shù)分離乳酸脫氫酶同工酶 97
實(shí)驗(yàn)29 血清蛋白的鹽析及清蛋白/球蛋白的測定 100
尖驗(yàn)30 血清蛋白醋酸纖維薄膜電泳分離及定量測定 103
實(shí)驗(yàn)31 酶的特異性及溫度、pH、激活劑、抑制劑對酶活性的影響 106
實(shí)驗(yàn)32 小鼠肝細(xì)胞核的分離、純化與鑒定 109
實(shí)驗(yàn)33 動(dòng)脈硬化指數(shù)的計(jì)算 112
實(shí)驗(yàn)34 糖的硅膠G薄層層析分析鑒定 114
第三章 創(chuàng)新設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn) 117
實(shí)驗(yàn)35 乙醛脫氫酶2基因型的檢測 117
實(shí)驗(yàn)36 針刺“足三里”穴位對家兔血糖濃度的雙向調(diào)節(jié)作用 120
實(shí)驗(yàn)37 小鼠PKCε相互作用蛋白質(zhì)的捕獲、鑒定 122
實(shí)驗(yàn)38 小鼠肝總蛋白質(zhì)的雙向電泳分離 125
實(shí)驗(yàn)39 人血漿同型半胱氨酸的測定（ELISA方法） 129
實(shí)驗(yàn)40 自毀容貌綜合征的生化與分子生物學(xué)分析 131
實(shí)驗(yàn)41 G6PD缺陷的診斷及其發(fā)病的分子基礎(chǔ) 132
實(shí)驗(yàn)42 HL-60細(xì)胞中DAPK基因甲基狀態(tài)的檢測 133
實(shí)驗(yàn)43 胰島素促進(jìn)HepG2細(xì)胞對葡萄糖吸收的檢測 135
第二篇 生物化學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù)
第四章 分光光度技術(shù) 141
第一節(jié) 分光光度技術(shù)的基本原理 141
第二節(jié) 分光光度計(jì)的組成與結(jié)構(gòu) 143
第二節(jié) 分光光度技術(shù)的應(yīng)用 145
第五章 電泳技術(shù) 148
第一節(jié) 概述 148
第二節(jié) 幾種常用電泳簡介 149
第六章 層析技術(shù) 152
第七章 離心技術(shù) 156
第一節(jié) 離心技術(shù)的基本原理 156
第二節(jié) 離心機(jī)的類型 157
第三節(jié) 制備型離心的分離方法 158
第四節(jié) 離心操作的注意事項(xiàng) 159
第八章 聚合酶鏈反應(yīng)與印跡技術(shù) 161
第一節(jié) PCR技術(shù) 161
第二節(jié) 印跡技術(shù) 165
第九章 基因工程技術(shù) 170
第一節(jié) 基因工程技術(shù)的相關(guān)概念 170
第二節(jié) 基因工程技術(shù)的基本原理及技術(shù)路線 171
第三節(jié) 基因工程技術(shù)在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用 175
第十章 熒光標(biāo)記技術(shù) 177
第一節(jié) 熒光現(xiàn)象 177
第二節(jié) 熒光探針 179
第三節(jié) 熒光標(biāo)記樣品的檢測 180
第十一章 RNA干擾技術(shù) 187
第一節(jié) RNA干擾的作用機(jī)制 187
第二節(jié) RNA干擾技術(shù)的應(yīng)用 189
第十二章 生物芯片技術(shù) 191
第一節(jié) 基因芯片 191
第二節(jié) 蛋白質(zhì)芯片 193
第十三章 雙向凝膠電泳 196
第十四章 蛋白質(zhì)三維結(jié)構(gòu)建模 200
第一節(jié) 蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)相關(guān)知識(shí) 200
第二節(jié) 蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)預(yù)測實(shí)例 201
參考文獻(xiàn) 205
附錄一 生物化學(xué)與分子生物學(xué)常用數(shù)據(jù)庫和軟件 208
附錄二 生物化學(xué)與分子生物學(xué)常用試劑和培養(yǎng)基的配制方法 210
附錄三 生物化學(xué)及分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)常用縮略語 213
附錄四 生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)常用詞中英文對照 216
獲得的，是否能夠識(shí)別其他種屬來源的同一種蛋白質(zhì)并與其結(jié)合。為了解這一問題，首先應(yīng)該向提供抗體的廠家了解情況，其次是查文獻(xiàn)了解是否有其他人成功應(yīng)用的范例，再就是檢索序列資料數(shù)據(jù)庫，比較不同種屬來源的相同種類蛋白質(zhì)的相關(guān)多肽片段的氨基酸序列的相似程度。如果對某一抗體的不同種屬的適用性情況無法了解，那就別無選擇，須要先少量購買一些抗體，做一個(gè)預(yù)實(shí)驗(yàn)來確定該抗體的適用性。
選擇抗體還需要注意的一點(diǎn)是，一般的抗目標(biāo)蛋白抗體的種屬來源應(yīng)該與待分析蛋白質(zhì)樣品的種屬來源不同。否則在應(yīng)用二抗檢測進(jìn)行顯示時(shí)，極易受蛋白質(zhì)樣品中存在的IgG干擾，影響結(jié)果的解釋，尤其對微量蛋白質(zhì)的檢測極為不利，應(yīng)該注意盡量避免這種情況的出現(xiàn)。
第二抗體的選擇主要是針對第一抗體的種屬來源和檢測顯示手段這兩方面進(jìn)行的，一般不需要再考慮其他方面。
2.過夜溫浴的注意事項(xiàng)
如果需要過夜、長時(shí)間抗體溫浴，需要防止雜菌大量繁殖。一般可以于4=C進(jìn)行溫浴，如果沒有4℃溫浴條件，可以在溫浴液中加入防腐劑。對于待用辣根過氧化物酶標(biāo)記二抗進(jìn)行檢測時(shí)，可以在溫浴液中加防腐劑硫柳汞至終濃度為0.05％。
【思考題】
1.一般科研工作實(shí)踐中，轉(zhuǎn)印膜都需要進(jìn)行染色和記錄結(jié)果，并且與最終的Westernblotting結(jié)果進(jìn)行對照。你認(rèn)為這有必要嗎？為什么？
2.蛋白質(zhì)印跡分析能否用于直接檢測未知蛋白質(zhì)？為什么？
3.如果某一蛋白質(zhì)的存在量足以用染色法直接顯示，是否仍然會(huì)有必要應(yīng)用操作較為煩瑣的蛋白質(zhì)印跡實(shí)驗(yàn)？為什么？
附：增強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光顯示方法
用增強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光顯示方法（enhanced chemiluminescence，ECL）進(jìn)行酶標(biāo)免疫檢測比常用的呈色顯示方法的檢測靈敏度高100～1000倍甚至以上，現(xiàn)在國內(nèi)外實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)將增強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光顯示方法作為蛋白質(zhì)印跡分析的常規(guī)檢測方法使用。此處介紹的增強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光顯示方法的所用試劑可以在市場上買到白行配制，與市場上可以購買到的成品增強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光顯示試劑相比，靈敏度上稍遜一籌，但是費(fèi)用極為低廉，適合于一般實(shí)驗(yàn)室采用。但是須要注意，使用增強(qiáng)的化學(xué)發(fā)光顯示方法的先決條件之一是需要有暗室可用。
……
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前言/序言
醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)是醫(yī)學(xué)教育的重要組成部分，是培養(yǎng)學(xué)生實(shí)踐能力、科學(xué)思維和創(chuàng)新精神的主要途徑，因此，提高醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)質(zhì)量將有助于提升整體醫(yī)學(xué)教育水平。生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)是當(dāng)代醫(yī)學(xué)研究的重要手段和方法，也是醫(yī)學(xué)相關(guān)專業(yè)和各層次學(xué)生的必修實(shí)驗(yàn)課。為了適應(yīng)高等醫(yī)學(xué)院校實(shí)驗(yàn)教學(xué)改革和發(fā)展的需要，構(gòu)建多層次、多模塊的醫(yī)學(xué)生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教學(xué)體系，我們編寫了本教材。
本教材分為兩篇，第一篇為生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，第二篇為生物化學(xué)與分子生物學(xué)技術(shù)。根據(jù)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和要求，結(jié)合教學(xué)邏輯和規(guī)律，為滿足不同層次學(xué)生的需求，將實(shí)驗(yàn)分為基礎(chǔ)性實(shí)驗(yàn)、綜合性實(shí)驗(yàn)和創(chuàng)新設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)3個(gè)模塊�；A(chǔ)性實(shí)驗(yàn)有助于鞏固學(xué)生基本理論知識(shí)和培養(yǎng)學(xué)生基本實(shí)驗(yàn)操作技能；綜合性實(shí)驗(yàn)多來源于教師的科研項(xiàng)目，應(yīng)用了多種生物化學(xué)與分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，經(jīng)過多輪教學(xué)的實(shí)際檢驗(yàn)，有利于培養(yǎng)學(xué)生的綜合分析能力；創(chuàng)新設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)從臨床病例出發(fā)，通過設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案，探討疾病的生物化學(xué)與分子機(jī)制，培養(yǎng)學(xué)生的科研能力。
本教材注重實(shí)驗(yàn)的科學(xué)性與實(shí)用性相結(jié)合、知識(shí)傳授與素質(zhì)培養(yǎng)相結(jié)合、實(shí)驗(yàn)技術(shù)與臨床應(yīng)用相結(jié)合。為了便于學(xué)生自主學(xué)習(xí)，還介紹了生物化學(xué)與分子生物學(xué)常用軟件和網(wǎng)絡(luò)資源。此外，為配合雙語教學(xué)的開展，附錄中有本教材中使用的儀器、常用試劑、名詞等的中英文對照。
各高等醫(yī)學(xué)院校根據(jù)各專業(yè)各層次學(xué)生的培養(yǎng)目標(biāo)和要求，可選擇本教材中不同模塊的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目實(shí)施實(shí)驗(yàn)教學(xué)。此外，本
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